液相色谱—串联质谱法同时检测食品中的4种黄曲霉毒素

作者:康绍英;周兴旺;张继红;杨代明 刊名:食品与机械 上传者:何强

【摘要】建立同时对食品中的4种黄曲霉毒素进行定性定量分析的高效液相色谱三重四极杆质谱确证方法。样品经甲醇-水提取、免疫亲和柱净化后,用高效液相色谱-串联质谱进行分析测定。黄曲霉毒素在所测浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系,r>0.998,平均加标回收率在80.6%~100.6%,相对标准偏差(RSD)在1.1%~7.5%,AFB1、AFG1的最低检出限为0.2μg/kg,AFB2、AFG2的最低检出限为0.05μg/kg。该方法快速、灵敏、准确、可靠,是食品中的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2测定的理想方法。

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黄曲霉毒素是由黄曲霉、寄生曲霉等真菌代谢产生的一类有毒的真菌毒素[1,2],是一种毒性极强的剧毒物质,对人及动物肝脏组织有破坏作用,严重时,可导致肝癌甚至死亡。黄曲霉毒素存在于土壤、动植物、各种坚果,特别是花生和核桃中。在大豆、稻谷、玉米、通心粉、调味品、牛奶、奶制品、食用油等制品中也经常发现黄曲霉毒素。目前发现黄曲霉毒素有20多个种类,其中以黄曲霉毒素B1(AFB1)、B2(AFB2)、G1(AFG1)、G2(AFG2)4种最为常见,而黄曲霉毒素B1又最为多见,其毒性和致癌性也最强,毒性大于氰化钾[3]。1993年黄曲霉素B1被世界卫生组织(WHO)的癌症研究机构划定为1类致癌物[4],受到世界各国的广泛关注。欧盟在98/53/EC指令中规定了人类直接食用的花生中黄曲霉毒素的限量为黄曲霉B1小于2g/kg,黄曲霉B1、B2、G1、G2总量小于4g/kg[5]。中国对食品中黄曲霉毒素也制定了严格的限量规定[6]。目前黄曲霉毒素的检测方法主要有薄层色谱法(TLC)[7-9]、酶联免疫吸附法(ELISA)[7,10]、微柱法[8]、免疫亲和柱荧光分光光度法[11]、液相色谱法(HPLC)[1,8,11-12]等。TLC虽然分析成本较低,但操作繁琐、耗时长、污染大、定量差、灵敏度差[13];ELISA虽操作简单、灵敏度高,但特异性差、重复性差,易出现假阳性[14]。HPLC因其高效、快速、灵敏度高、重现性好、准确可靠等优点而得到越来越广泛的应用,HPLC通常使用荧光检测器,样品经226多功能净化柱或免疫亲和柱净化后,还需要在柱前或柱后进行衍生,样品处理烦琐、操作复杂;本方法拟采用免疫亲和柱净化、高效液相色谱串联质谱法测定食品中的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2,因为该方法目标分析物无需衍生可直接测定,能够显著的提高结果准确性,且大大缩减了样品前处理时间,此方法快速、灵敏、准确、可靠,本研究旨在寻求食品中的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2测定的理想方法。1材料与方法1.1仪器TSQQuantum三重四级杆串联质谱仪:ThermoTSQUltraAM,赛默飞世尔科技ThermoFisherScientific公司,配有电喷雾电离源(ESI);黄曲霉毒素免疫亲和柱:VICAM,ProductbyVICAM,U-nitedStatesofAmerica;负压固相萃取装置:天津博纳艾杰尔科技有限公司;恒温振荡培养箱:KYC-1102C型,上海福玛实验设备有限公司;循环水式真空泵:SHZ-D()型,巩义市予华仪器有限责任公司;电子分析天平:BS224S型,赛多利斯(北京)仪器系统有限公司。1.2试剂黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2混合标准溶液(苯乙腈(98+2)溶液):1mL,黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2浓度分别为1.055,0.327,1.082,0.309g/mL,SUPELCOAnalyticalUSA。甲醇:HPLC,ProductofTedia,UnitedStatesofAmerica;氯化钠、氢氧化钠:分析纯,国药集团化学试剂有限公司;磷酸二氢钾:分析纯,天津森润生物技术有限公司;甲酸:分析纯,重庆川东化工(集团)有限公司化学试剂厂;乙酸铵:分析纯,西陇化工股份有限公司;甲醇水(7+3):取70mL甲醇加30mL水;甲醇水(8+2):取80mL甲醇加20mL水;pH7.0磷酸盐缓冲溶液:取25.0mL0.2mol/L的磷酸二氢钾溶液与29.1mL0.1mol/L的氢氧化钠溶液混匀后,稀释到100mL。1.3方法1.3.1提取(1)大米、玉米、小麦

参考文献

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