草苁蓉提取物对HepG2细胞氧化应激损伤的保护作用

作者:尹学哲;王玉娇;尹基峰;金梅花;金明;全吉淑 刊名:食品科学 上传者:王敏

【摘要】目的:研究草苁蓉乙醇提取物(Boschniakia rossica ethanol extract,BREE)对H2O2诱导的Hep G2细胞氧化应激损伤的保护作用。方法:用H2O2诱导Hep G2细胞氧化应激损伤,采用噻唑蓝(methylthiazolyldiphenyltetrazolium bromide,MTT)比色法检测BREE对Hep G2细胞氧化损伤的保护作用;比色法测定培养液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)的释放率,以及细胞中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、还原型谷胱甘肽(reduced glutathione,GSH)及丙二醛(malondialdelyde,MDA)水平;蛋白印迹法测定细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)总蛋白及其磷酸化形式的表达水平以及核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)的核内转移。结果:BREE单独处理时,在所测质量浓度范围内对Hep G2细胞增殖无显著影响。与模型组相比,BREE能显著提高氧化损伤细胞的存活率;降低氧化损伤细胞培养液中LDH、ALT和AST的释放;降低细胞MDA水平,增高细胞SOD活性和GSH含量。氧化损伤发生的不同时期,ERK、JNK、p38 MAPK和NF-κB蛋白均有激活,而BREE在氧化损伤发生1 h时减少ERK激活和NF-κB核转移,氧化损伤发生12 h时减少JNK蛋白激活。结论:BREE对H2O2所致Hep G2细胞氧化应激损伤具有保护作用,此作用可能与其抑制ERK、JNK的活化和NF-κB的核内转移有关。

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细胞内氧化与抗氧化之间的平衡对细胞生存至关重要,氧化应激水平的提高能够损伤细胞甚至导致细胞死亡[1]。因此,自由基与多种疾病的关系已越来越引起人们的重视,自由基生物医学的发展使得探寻高效低毒的天然抗氧化剂成为生物化学和医药学科领域的研究热点[2]。草苁蓉(BoschniakiarossicaFedtsch.etFlerov)又名不老草,为列当科草苁蓉属多年生寄生性草本植物,是国家二类保护植物。草苁蓉性味甘、酸、湿,全草入药。具有补肾壮阳、滋补强身、润肠止血、延年益寿的功效;用于治疗肾虚阳痿、腰膝冷痛、膀胱炎、功能性子宫出血、肾炎以及肾脏和膀胱出血等疾病[3]。研究发现,草苁蓉具有抗脂质过氧化、增强免疫、抗炎及抗肿瘤等作用[3-5],这与草苁蓉醛、草苁蓉酸、草苁蓉碱、草苁蓉内酯、草苁蓉纳拉苷和多糖等多种活性成分有关[3-6]。本实验利用H2O2诱导人HepG2细胞氧化应激损伤模型,检测草苁蓉提取物(Boschniakiarossicaethanolextract,BREE)对HepG2细胞的保护作用,以期为草苁蓉的开发利用提供科学依据。1材料与方法1.1材料、试剂与仪器草苁蓉采自吉林省长白山,经延边大学药学院刘勇镇教授鉴定为草苁蓉(BoschniakiarossicaFedtsch.etFlerov)。人肝癌细胞HepG2南京凯基生物有限公司;DMEM培养基、小牛血清美国Gibco公司;噻唑蓝(methylthiazolyldiphenyl-tetrazoliumbromide,MTT)美国Sigma公司;小鼠细胞外信号调节蛋白激酶(extracellularsignal-regulatedkinase,ERK)多克隆抗体、兔p-ERK多克隆抗体、兔c-JunN末端激酶(c-JunN-terminalkinase,JNK)多克隆抗体、兔p-JNK多克隆抗体、兔p38丝裂原活化蛋白激酶(p38mitogen-activatedproteinkinase,p38MAPK)多克隆抗体、兔p-p38MAPK多克隆抗体、兔核转录因子-B(nuclearfactor-B,NF-B)多克隆抗体美国Abcam公司;乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenase,LDH)、谷丙转氨酶(alanineaminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartateaminotransferase,AST)、超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)、还原型谷胱甘肽(reducedglutathione,GSH)、丙二醛(malondialdelyde,MDA)及蛋白质试剂盒南京建成科技有限公司。3-30K型离心机美国Sigma公司;D1320型超净工作台北京东联哈尔仪器制造有限公司;DYY-12型电泳仪、DYCP-31D型电泳槽、DYCZ-24DN型电泳仪北京六一仪器厂;Trans-Blot转印槽美国Bio-Rad公司;UVP凝胶成像分析仪美国UVP公司;RT-2100型酶标仪深圳雷杜公司;S22PC型分光光度计上海精密科学仪器有限公司。1.2方法1.2.1BREE的制备草苁蓉用90%乙醇提取后,依次经等体积石油醚、氯仿、乙酰乙酯和正丁醇萃取,减压蒸馏即得BREE,得率约为13%[5]。主要成分有草苁蓉多糖(质量分数13%)、草苁蓉环烯醚萜(质量分数47%)和草苁蓉苯丙烯醇苷(质量分数32%)。1.2.2细胞培养[7]HepG2细胞用含体积分数10%胎牛血清的DMEM培养液,于37、5%CO2、饱和湿度条件下静置培养,细胞铺满瓶底

参考文献

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