高效液相色谱法同时测定饮料中的7种人工合成色素

作者:丘福保;卢丽明;黄诚;欧阳珮珮 刊名:广州化工 上传者:周克

【摘要】样品经自制聚酰胺粉固相萃取柱富集和净化后进行HPLC分析。采用Agilent Eclipse XDB-C18(4.6mm×150mm×4.6μm)色谱柱,以甲醇/乙腈(1∶2,体积比)和乙酸铵(0.02mol/L)为流动相进行梯度洗脱,流速1.0mL/min,检测波长为254nm和627nm,分析时间15min左右。7种人工合成色素在1.00~20.0mg/L质量浓度范围内线性关系良好(r均大于0.9999),加标回收率在89.0%~101%之间,相对标准偏差0.4%~3.4%。该方法操作简便,结果准确可靠,重复性好,适用于饮料中多种人工合成色素的同时检测。

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人工合成色素和天然色素统称为食品着色剂。与天然色素相比,人工合成色素因其色泽艳丽、性质稳定、着色力强且价格低廉而广泛应用于食品生产加工行业中。由于人工合成色素主要是以苯、甲苯、萘和苯胺等为原料,经磺化、硝化、卤化、偶氮化等一系列有机反应所制得,长期食用或使用过量会严重损害人体健康。GB2760-2011《食品添加剂使用卫生标准》[1]中规定了食品添加剂的使用原则、允许使用的食品添加剂品种、使用范围及最大使用量或残留量。我国允许使用的人工合成色素有11种,分别是柠檬黄、新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、靛蓝、喹啉黄、赤藓红和酸性红。目前,人工合成色素的测定方法有薄层色谱法、高效液相色谱法、超高效液相色谱法、高效液相色谱-质谱/质谱联用法、导数伏安法、毛细管电泳法等[2-8]。国标GB/T5009.35-2003《食品中合成着色剂的测定》[9]第一法高效液相色谱法用聚酰胺粉吸附法处理样品较为费时,且按国标所述梯度洗脱时柠檬黄和新红的色谱峰分离不大理想。本研究在此基础上进行改进,样品经预处理后通过自制聚酰胺粉固相萃取柱富集净化,并调整流动相的组成和梯度,采用高效液相色谱法同时测定饮料中常见的柠檬黄、新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝等7种人工合成色素,结果令人满意。1材料和方法1.1仪器高效液相色谱仪AgilentLC1100,带二极管阵列检测器,安捷伦公司;Milli-Q超纯水机,美国Millipore公司。1.2试剂人工合成色素标准溶液(柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、亮蓝)均购于国家标准物质研究中心,0.500mg/mL;诱惑红购于北京海岸鸿蒙标准物质技术有限责任公司,1.00mg/mL;新红购于农业部环境保护科研监测所,100mg/L;聚酰胺粉,80/100目;pH=6的水,超纯水加冰乙酸调节pH=6;甲醇-甲酸溶液(64,体积比),按体积比配制;无水乙醇-氨水-水(721,体积比),按体积比配制;甲醇、乙腈(色谱纯)均购于德国默克公司。1.3标准溶液的配制及定量方法分别准确吸取适量的上述标准原液,用超纯水定容,配制浓度为40.0mg/L的混合标准储备液。再分别吸取一定量的混合标准储备液,用超纯水稀释成质量浓度为1.00mg/L、2.00mg/L、5.00mg/L、8.00mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L的混合标准溶液,经0.45m水相滤膜过滤后,进行HPLC测定。以标准溶液浓度对相应的色谱峰面积绘制标准曲线,外标法定量。1.4自制聚酰胺粉固相萃取柱取10mL注射器,底部放置一层脱脂棉,称取1g聚酰胺粉加超纯水调成糊状后填入注射器中,用注射器推杆将其压实后用超纯水润洗1~2次活化并保持湿润状态待用。1.5样品处理方法称取10g左右样品于100mL烧杯中,水浴加热驱除二氧化碳或乙醇后补加适量超纯水,用冰乙酸调节溶液pH至酸性。将样液加入已活化好的自制聚酰胺粉小柱中,用少量pH6超纯水淋洗3次,然后用甲醇-甲酸(64,体积比)洗涤3次,再用超纯水洗至中性,用无水乙醇-氨水-水(721,体积比)解吸,收集洗脱液,水浴蒸发至近干,用超纯水定容至5mL,经0.45m水相滤膜过滤后,进行HPLC测定。1.6液相色谱分析条件色谱柱:AgilentEclipseXDB-C18(4.6mm150mm4.6m);检测波长:254nm和627nm;进样量:5L;柱温:35;流速:1.0mL/min;检测器:二极管阵列检测器;流动相及梯度:A为甲醇-乙腈(12,体积比),B为0.02mol/L乙酸铵水溶液,梯度见表1。表1HPLC梯度洗脱

参考文献

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