丹参酮ⅡA对大鼠心肌细胞H9C2氧化损伤的保护作用

作者:刘畅;王庸晋;曹文君 刊名:国际心血管病杂志 上传者:刘艳

【摘要】目的:探究丹参酮ⅡA对大鼠心肌细胞H9C2氧化损伤的保护作用。方法:建立H2O2诱导大鼠心肌细胞H9C2氧化损伤模型。将体外培养的H9C2细胞随机分为空白对照组、DMSO溶剂对照组、H2O2模型组、丹参酮ⅡA高、中、低剂量组。用MTT法测定心肌细胞存活率,并检测培养液上清中乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)以及丙二醛(MDA)的水平。结果:与空白对照组相比,H2O2模型组细胞存活率显著降低,LDH、MDA水平升高,SOD水平降低;与H2O2模型组相比,丹参酮ⅡA高剂量组心肌细胞存活率显著增高,LDH和MDA水平降低,SOD水平升高(P<0.01)。结论:丹参酮ⅡA能够减轻心肌细胞氧化损伤。

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冠状动脉内溶栓、冠状动脉支架置入术及冠状动脉搭桥术在治疗缺血性心脏病中的应用日益广泛,随着心肌供血的改善,缺血-再灌注损伤带来的问题日益突显。研究发现,在缺血-再灌注损伤、心力衰竭等病变过程中通常都会出现心肌组织氧化损伤。心肌损伤区能够产生大量氧自由基,使链式脂质发生过氧化反应,进而损伤心肌组织,使用自由基清除剂能够减轻心肌细胞的氧化损伤[1]。丹参是一种活血化瘀的传统中药,其脂溶性有效成分为丹参酮A[2]。丹参酮A具有抑制血小板黏附聚集、抗动脉粥样硬化和血栓形成、抗缺氧缺血、保护心血管内皮细胞和心肌细胞、改善微循环等多种作用[3-4]。本研究用过氧化氢(H2O2)体外诱导大鼠心肌细胞氧化损伤模型,观察不同浓度的丹参酮A处理对H2O2诱导的心肌细胞氧化损伤的保护作用及机制,为研究丹参酮A的临床药理学作用提供实验依据。1材料和方法1.1细胞系和主要试剂大鼠H9C2心肌细胞系,购于中国科学院上海生命科学研究院。DMEM培养基、胰蛋白酶、胎牛血清购自Hyclone公司;丹参酮A购自中国药品生物制品检定所;MTT购自美国Sigma公司;乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所;实验中所用其他试剂均为进口或国产分析纯。1.2方法1.2.1心肌细胞培养在37、5%CO2条件下,用含10%胎牛血清的DMEM培养基培养大鼠H9C2心肌细胞,每2d换1次液。培养至细胞融合度达80%时,用0.25%胰蛋白酶消化传代,培养至6~7代时,将细胞接种于6孔板中培养,调整细胞密度为1106/mL,待细胞生长至融合状态,分组进行实验。1.2.2H2O2诱导H9C2心肌细胞氧化损伤取生长状态良好的H9C2心肌细胞,将其随机分成5组:分别加入0、100、200、400、800mol/LH2O2孵育细胞4h,用MTT法检测细胞存活率。1.2.3丹参酮A预处理把生长良好的H9C2心肌细胞随机分成6组:空白对照组、溶剂对照组(加入含0.5%DMSO的培养基)、H2O2模型组(加入400mol/LH2O2孵育4h)、丹参酮A低剂量组、中剂量组、高剂量组(分别加入110-5、510-5、110-4mol/L丹参酮A预孵育细胞12h,再加入400mol/LH2O2继续孵育4h)。每组设6个平行孔,实验重复3次。1.2.4MTT法检测心肌细胞存活率将处理过的H9C2心肌细胞接种于96孔培养板中,细胞密度为2104/孔。每孔加入50L新鲜的MTT(5mg/mL),于37、5%CO2条件下培养4h,弃上清,每孔加入200LDMSO,37轻摇10min,之后用酶标仪测定490nm波长下的吸光度。心肌细胞存活率的计算公式为:心肌细胞存活率=(实验组OD值/对照组OD值)100%。1.2.5培养基中LDH、SOD、MDA水平测定取50L细胞培养上清液,使用比色法测定LDH,使用黄嘌呤氧化酶法测定SOD,使用硫代巴比妥酸比色法测定MDA,严格按照试剂盒说明书进行操作。1.3统计学分析运用SPSS17.0软件进行统计分析,计量数据用珚xs表示,多组数据之间比较使用单因素方差分析(OneWayANOVA),组间两两比较使用LSD法。P<0.05代表差异具有统计学意义。2结果2.1H2O2诱导大鼠心肌细胞氧化损伤随着H2O2浓度增加,H9C2心肌细胞存活率降低(P<0.01),H9C2心肌细胞损伤程度呈现H2O2浓度依赖性(见图1)。其中400mol/LH2O2诱导下,细胞损伤明显,存活率降至约60%,而800mol/LH2O2诱导时,细胞氧化损伤严重

参考文献

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