煅石膏与骨形成蛋白载体系统的建立及其骨诱导活性研究

作者:田卫东;乔鞠;李声伟;郑晓辉;高振南 刊名:中国口腔种植学杂志 上传者:聂雪丽

【摘要】将牛骨形成蛋白(bBMP)与煅石膏(PLP)复合物及单纯PLP和单纯bBMP分别植入狗下颌的实验性骨缺损中,术后1,2,4和8周分别观察,发现PLP在植入后早期吸收,bBMP-PLP复合物有明显的骨诱导性,可防止BMP扩散及过快吸收,使其更持久地作用于周围的细胞。可在相对较短时间内,促进骨缺损的修复,研究表明,PLP是一种较适宜的BMP载体材料

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骨形成蛋白(hane。Iphogenetlcprotein,BMP),作为一种高效的骨诱导物质已被充分证实,临床初步应用也获得令人鼓舞的效果。但由于BMP产量低,价格昂贵,植人机体后吸收快,对于较大的骨缺损不能提供支架作用,而且其诱导成骨的需要量相对于缺损区面积而言,是极其微小的,难以均匀分布于缺损区,其不足使得BMP的应用受到很大限制。因此,寻找一种生物相容性好的生物或非生物载体,以吸附、结合、相嵌的形式将BMP载人体内骨缺损区,使BMP均匀地与周围组织接触,并作为新骨长人的支架,同时利用这些载体的生物吸收来控制BMP的释放,则对改善BMP的应用效果有极其重要的意义。为此,本研究意于建立可供临床应用的烟石膏(plasterofparis,PLP)与BMP载体系统,并探讨其体内的骨修复作用及转归。l材料和方法11牛BMP提取、纯化及烟石膏制备取新鲜一岁小牛管状长骨,除去骨笛端,除净骨髓及表面软组织,液氮冷冻后粉碎成约Inun’大小的骨颗粒,按Urist方法,对颗粒骨进行去脂脱钙,尿素提取BMP,纯化后的bBMP经SDSPACE电泳分析,并植人小鼠后肢股部的肌肉陷窝内,经X线和组织学观察证实所提取的bBMP具有骨诱导活性,所提取的bBMP消毒备用。滚石膏的制备详见参考文献”’,按实验性骨缺损的大小取一定量PL,,用生理盐水调和,在凝固前加人bBMPSIng制成PLPbBMP复合物。12动物实验方法及分组选用本地产健康杂种狗8只,年龄l2岁,体重1015kg,雌雄不限,随机分组。经腹腔注射25戊巴比妥钠(剂量3eqkg)麻醉后,无菌条件下经颌下切口暴露下颌骨体部,双侧下颌骨体部形成2个15mxnx10nun的箱状骨缺损,生理盐水冲洗去净缺损区骨碎屑,按空白对照组、单纯PLP组、单纯bBMP组和PLPbBMP组分别植人不同组材料,分层缝合关闭切口,术后3天,每天给肌注青霉素80An,庆大霉素8Th抗感染。13组织学观察术后1,2,4,8周分别处死2只动物,取下颌骨行X线摄片,将植人材料连同周围骨组织完整取出,经10甲醛固定,脱钙,石蜡包埋切片、HE及新三色法染色,光镜下观察。14定量组织学测定新骨形成选用组织学观察标本的切片,每一实验周期每种材料6张切片,将切片置于光学显微镜下,每张切片随机选择4个测定区,用计算机图象分析仪测定新骨面积,具体方法详见参考文献‘。15免疫组织化学观察采用bBMPM。AbABC免疫组化法,石蜡切片选用组织学标本切片,bBMPMCAb由第四军医大学口腔医学院病理教研室制备并提供,ABC试剂盒由美国Vector公司生产。主要步骤如下:门)切片脱蜡,水化;(2)03甲醇一过氧化氢,30分钟,消除内源酶;(3)1、5正常羊血清,消除非特异性抗原;(4)bBMPMCAb(l:50),37,l小时;(5)生物素化二抗,马抗鼠lgG(1:200),37t,30分钟;(6)ANC复合物门:100),37,30分钟;(7)DAB显色,10分钟;(8)苏木精复染,脱水、透明、封固。每次染色均作阴性对照,以PBS代替BMPMCAb,其结果为阴性。2结果21一般情况术后所有动物伤口均无感染破溃和分泌物,切口1期愈合,无实验动物意外死亡。22组织学及免疫组织化学观察结果术后1周:空白对照组和各实验组植人区炎性反应明显,局部以炎性细胞浸润为主。PLP组和PrybBMP组植人区纤维结缔组织内可见红染或蓝染均质无结构的PLP,PLPbBMP组植人区宿主骨床有少量新骨形成,纤维结缔组织中有大量间充质细胞聚集。单纯bBMP组植人区组织中可见软骨细胞聚集,部分

参考文献

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