细胞周期蛋白D_1基因表达与喉癌生物学行为的关系

作者:周文胜;钟瑞胜;谭慎薇;刘秋润 刊名:临床耳鼻咽喉科杂志 上传者:吴兆兵

【摘要】为探讨cyclinD1基因扩增的临床意义,采用免疫荧光技术检测了25例喉鳞癌的新鲜标本。发现细胞周期蛋白D1基因(cyclinD1基因)在喉癌中有9例扩增(占37%),而且与肿瘤分级和TNM分期差别无显著性意义(P>0.05);而与肿瘤组织相邻的正常组织表达阴性,或仅见极个别散在表达,推测cyclinD1基因在喉癌的发生发展中可能是非早期现象。通过跟踪的调查发现,在cyclinD1基因表达阳性的肿瘤9例中,有4例复发;而cyclinD1基因表达阴性的肿瘤16例中,仅1例复发,二者差别有显著意义(P<0.05)。所以cyclinD1基因的扩增可望作为一种新的预后标志。

全文阅读

研究表明,喉癌的发病V个人活习惯(抽烟、酗酒)、环境污染、人类乳头状病;自感染等因素有关。随着分子牛物学的发收,肿瘤细胞的增殖c在分子水平得到解释。cmyc、EGFR、Ras等癌基回的扩增,抑癌社1川p53的突变和p16的纳合性缺人,介肿瘤的发十、发展中都起着重要作用。通过对等位基因型的分析发现,染色体llq13区的扩增在头颈部肿瘤达到3060’“。在甲状旁腺瘤和B淋巴细胞瘤中,由于染色体的转位也导致厂llq13区的扩增”’。而编码细胞周期蛋白D拉国(cyclinD;基因)正位于该区。在人类食管癌、肺癌、膀既癌和肝癌中均发现了cyclinDl基因的过度表达。为了探索cyclinD;基同喉癌中的麦达状况及其与肿瘤的生物学行为的关系,本研究用免疫荧光法对25例新鲜标本冰冻切片进行检测。回材料和方法工且肿瘤材料及处理所用的25例新鲜标本由同济医科大学附属同济医院和协和医院的喉癌手术获取。肿块切除后,取肿瘤组织及与其相邻的正常组织各1块,30min内存入一80C液氮保存。直至检测时切片固定。12免疫荧光检测每例标本作5Pm厚切片,置于载玻片上,冷丙酮固定,常温下干燥。切片加入2牛血清白蛋白,放入湿盒,在37C恒温箱内孵育15min。PBS中冲洗,加入抗。yclinD;单克隆抗体(中山公司产,HDll),稀释度1:ZO,4C过夜。PBS冲洗,加入荧光标记羊抗鼠二抗(武汉生物制品所产),37C恒温箱内孵育20min。PBS冲洗3次,双蒸水冲洗3次。切片置于Leitz荧光显微镜下观察。采用PBS缓冲液代替一抗作空白对照。同时作切片HE染色,对比荧光片进行形态学观察。13统计学处理实验所得数据,用Fisher精确概率法进行统计学分析。14判定方法患者术后无论是否进行放疗或化疗,术后24个月进行随访,颈部均未发现包块或颈部淋巴结肿大,亦未发现远处转移者,便定为复发阴性。颈深部有淋巴结肿大或局部包块,使定为复发阳性。双盲法在荧光显微镜下观察组织的cyclinD;基因的免疫反应性。反应阳性可见细胞与细胞之间深浅不一的黄色荧光强度,而且荧光几乎仅存于细胞核中。有些癌细胞呈强阳性表达,有些癌细胞几乎看不到阳性表达。而与癌组织相邻的正常组织未见阳性表达或只有散在零星表达。每例肿瘤样本连续观察5个高倍视野,每个视野计数IOO个肿瘤细胞,取平均值。根据Jirina的分类法“‘,阳性细胞超过6O为强阳性,示为“抖”;阳性细胞在5一6O之间为中度阳性,示为“”;阳性细胞少于5w或看不到明显阳性细胞为弱阳性或阴性,示为“”。相对于正常组织的表达结果,超过5细胞阳作染色即可认为“过度表达”(Hi强阳性和中度阳性)。2结果25例标本。yclinD;表达情况如表1。由表1可见,。yclinD;基因过度表达与肿瘤分级、临床TNM分期差异无显著性(P005)。cvclinD;基因过度表达与喉癌复发的关系见表2。由表2可以看出,cyclinD1基因过度表达与喉癌的复发紧密相关。3讨论cgclinD;基因在1991年被Rosenberg等首次鉴定出来,其具有促使细胞成熟的功能。在细胞分裂G;期迅速达到其数量和活性的高峰,随细胞分裂至S期,又迅速降解。因此认为,。yclinD;基因是细胞分裂通过G;期的重要调节蛋白。因cyclinD;基因存在于细胞内的阶段性以及其较短的半衰期(153Omin),所以在正常组织中很难检测到cyclinD;基因的阳性表达。近年来的研究揭示,细胞周期蛋白在细胞分裂过程中的作用机制如下:细胞周期蛋白依靠细胞周期蛋白依赖激酶(cyclidependenklnases,CDKs

参考文献

引证文献

问答

我要提问