食品中多重耐药大肠埃希氏菌和沙门氏菌质粒图谱分析

作者:白松涛;林琳;刘渠;刘衡川;李灶平 刊名:现代预防医学 上传者:焦赛赛

【摘要】目的:对自深圳市自由市场生肉类食品中分离得到的30株对3种和3种以上抗生素耐药的大肠埃希氏菌和31株对3种以上抗生素耐药的沙门氏菌进行质粒图谱分析,探讨质粒与耐药性的关系。方法:碱裂解法。结果:耐药谱不同的大肠埃希氏菌的质粒分子分型结果可以相同,31株多重耐药沙门氏菌有25种不同的分型结果。结论:细菌的耐药性与其携带的质粒的多少和大小没有直接的关系。

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质粒(Plasmid)是最早发现的细菌染色体外遗传标记,大小从1kb到200kb不等,为双链、闭环的DNA分子,具有自主复制和转录能力,并能稳定遗传。质粒图谱分析是依据菌株携带质粒的多少及大小来对细菌进行分型的方法,可在分子水平上鉴定菌株之间的内在同源联系。该方法具有简便、快速、重复性好等优点,在疾病爆发的流行菌株同源性分析、追踪传染源及质粒流行的调查等方面广泛使用[1]。我们对食品中分离得到的多重耐药的大肠埃希氏菌和沙门氏菌进行了质粒图谱分析。现将结果报道如下。1材料与方法1.1材料1.1.1实验菌株自深圳市自由市场生肉类食品中分离得到的30株对3种和3种以上抗生素耐药的大肠埃希氏菌和31株对3种以上抗生素耐药的沙门氏菌。1.1.2标准菌株大肠埃希氏菌E.coliV517,由四川大学华西公共卫生学院医检教研室提供。1.1.3抗生素药敏纸片广谱青霉素(AMP)、四环素(TCY)、磺胺类(SS)等19种抗生素药敏纸片购自北京天坛药物生物技术开发公司。1.1.4培养基普通营养琼脂培养基和LB肉汤。1.1.5主要化学试剂溴化乙啶(EB)为Sigma产品,三羟甲基氨基甲烷(Trisbase)、琼脂糖购自华美生物工程公司,酚、氯仿、无水乙醇等试剂均为进口或国产分析纯(AR级)。1.1.6主要仪器设备Eppendorf微量取液器(10l,20l,200l,1000l),空气浴振荡培养箱,低温高速离心机,恒压恒流电泳仪,-20低温冰箱,凝胶成像分析系统,纯水仪,水平电泳槽。1.2方法根据文献[2]操作。1.2.1质粒分子量计算在琼脂糖凝胶电泳中,质粒分子量的对数值与质粒分子的迁移速率成反比[2]。以E.coliV517的质粒DNA提取物在琼脂糖凝胶电泳中的迁移距离与其分子量的常用对数值作标准曲线,计算各菌株携带的质粒的分子量。2结果2.1质粒图谱分型30株对3种及3种以上抗生素耐药的大肠埃希氏菌中没有检测到质粒的有1株(E222),10株菌只有1个质粒,5株菌只有2个质粒,携带有3个及3个以上质粒的菌株有14株。耐药谱不同的菌株的质粒分子分型结果可以相同,但仅限于只携带1个质粒的菌株。只有3株菌携带有分子量大于30kb的大质粒。各多重耐药大肠埃希氏菌菌株的质粒携带情况见表1。31株对3种以上抗生素耐药的沙门氏菌,都携带有1个以上的质粒。只携带了1个或2个质粒的菌株各有5株,21株携带了3个以上的质粒。只有4株携带有分子量大于30kb的大质粒。31株多重耐药沙门氏菌有25种不同的分型结果。各多重耐药沙门氏菌菌株的质粒携带情况见表2。2.2细菌的质粒携带与耐药性的关系菌株SX1-SX6的耐药谱分别为SX1:Amp-Pip-Str-Tcy-Sss-Sxt,SX2:Cep-Amc-Tcy,SX3:Cep-Amc-Str-Nal-Tcy-Sss-Sxt,SX4-SX6:Amp-Str-Tcy-Sss-Sxt,菌株S148:Amp-Cep-Amc-Str-Nal-Tcy-Sss。菌株SX3对7种抗生素耐药,菌株SX1对6种抗生素耐药,但SX1的质粒条带数比SX3多,而且包括了SX3的所有小质粒。菌株SX2仅对三种抗生素耐药,但也有1条大质粒。而耐药谱相同的菌株SX4-SX6,SX4和SX6有相同的质粒图谱,而SX5的质粒图谱与S148相同。见图1。表1多重耐药大肠杆菌的质粒携带情况质粒数大肠杆菌菌株及其质粒大小(kb)0E2221E113E141E102E189E184(9.6)E121E209(8.2)E240(9.3)E241(8.7)E18(11)2E16(3.6,

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