构建单纯疱疹病毒易感的鼠黑色素瘤细胞系B16RHSV

作者:庄秀芬;周爱萍;施桂兰;韩香萍;李洁;张郁;张友会;张叔人;刘滨磊 刊名:中华肿瘤杂志 上传者:徐艳国

【摘要】目的 构建溶瘤性单纯疱疹病毒( oHSV)易感的C57/BL小鼠黑色素瘤细胞系B16RHSV,同时仍保留其在小鼠体内诱导肿瘤生长的能力.方法 以人黑色素瘤细胞系A375的基因组DNA为模板,采用聚合酶链反应(PCR)扩增出疱疹病毒侵入介体(HVEM),将扩增产物克隆到pGEM-T Easy载体中并测序.将测序正确的HVEM基因克隆入pcDNA3质粒载体,产生pcDNA3-HVEM.以pcDNA3-HVEM质粒载体转染C57/BL小鼠黑色素瘤细胞系B16-F10,使用含有GG418的完全培养基筛选可能的阳性克隆,并通过免疫磁珠筛选出表达HVEM的细胞,命名为B16RHSV.用表达绿色荧光蛋白(GFP)的oHSV( oHSVGFP)与B16RHSV细胞体外共培养,观察细胞病变效应和GFP的表达情况.分别以相同剂最的B16-F10和B16RHSV细胞接种于C57/BL小鼠右侧背部皮下,观察这两种细胞诱导小鼠体内形成肿瘤的能力.结果 在荧光显微镜下可观察到B16RHSV细胞表达绿色荧光并出现细胞病变效应,证明B16RHSV细胞能够被oHSV感染并在细胞内繁殖,而其亲代细胞B16-F10则不能.B16RHSV和B16-F10细胞接种于小鼠5d后,两组小鼠均可观察到肿瘤生长,且肿瘤生长情况基本一致.用oHSVGFP治疗两种细胞的荷瘤鼠,仅在B16RHSV细胞荷瘤的小鼠体内显示出明显的溶瘤效应.结论 构建的B16RHSV是对oHSV易感、保持体内成瘤性的小鼠黑色素瘤细胞系.

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年 月 第 卷 第 期 ,, 构 建 单 纯疱 疹 病 毒 易 感 的 鼠黑 色 素 瘤 细 胞 系 基 础 研 究 庄 秀芬 周爱 萍 施 桂 兰 韩香 萍 李 洁 张郁 张友 会 张叔人 刘滨磊 【摘 要】 目的 构 建 溶 瘤 性 单 纯 疱 疹 病 毒 ()易 感 的 小 鼠黑 色 素 瘤 细 胞 系 ,同时仍保留其在小 鼠体 内诱导 肿瘤 生长的能 力。方法 以人黑色 素瘤 细胞 系 的基 因 组 为模板 ,采用聚合 酶链 反 应 ()扩增 出疱 疹 病毒侵 入 介体 (),将 扩增 产 物克 隆 到 载体中并测 序 。将 测 序 正确 的 基 因 克隆 入 质粒 载 体 ,产 生 一 。以 一 质粒 载体转染 小 鼠黑色素瘤细胞系 ,使用含有 的完 全 培养基筛选可能 的阳性克 隆 ,并通过免疫磁珠筛 选出表达 的细胞 ,命名为 。用表 达 绿 色荧 光蛋 白()的 ( )与 细胞体 外共培养 ,观察 细胞病 变效应 和 的表 达情 况。分别以相同剂量 的 一和 细胞接种于 小 鼠右侧背部皮 下 ,观 察这两种 细 胞诱 导小 鼠体 内形成肿瘤 的能力 。结果 在荧 光显微镜 下可观察 到 唧细胞表 达绿色 荧光并 出现细胞病变效应 ,证 明 细胞 能够被 感 染并在 细胞 内繁殖 ,而其 亲代 细胞 则 不 能。 和 细胞接种于小 鼠 后 ,两 组小 鼠均可 观察到 肿瘤生 长 ,且肿瘤 生长 情况 基本一 致。用 甜治疗两种细胞 的荷瘤 鼠 ,仅在 细胞荷瘤 的小 鼠体内显示 出明显 的溶瘤 效 应。结论 构建的 是对 易感 、保持体 内成 瘤性的小 鼠黑色素瘤 细胞系。 【主题词 】 单纯疱疹病毒属 ; 黑色素瘤 ; 疱 疹病毒侵入介体 ; 小 鼠 “ ,,,】,,, ’ 。 。 : ,: 【】 () ( ), ()一 ( ) ,’ , , , 【】 ; ; ; 溶瘤性单纯疱疹病毒 ( : 作者单 位 :中国医学科学 院 北京协 和医学 院肿瘤 医院肿 瘤研究所 免疫室(庄 秀芬 、施桂 兰、李洁 、张郁 、张友会 、张 叔人 、刘滨 磊 ),内科 (周爱萍 );南开大学生命科学学院(韩香萍 ) 通信作 者 :刘滨磊 ,: ,)能够选择性感染肿瘤细 胞并在其 中复 制 ,最终裂解 、杀死肿瘤细胞 。目前 ,已在多种动物 肿 瘤 模 型 中 证 实 , 具 有 良 好 的 抗 肿 瘤 效 果 。黑色素瘤是一种常见的恶性肿瘤 ,对传统治 疗方法不敏感,有 望成为治疗 黑色素瘤 的 有 效方 法 。选 择恰 当 的肿瘤 细胞 系建 立动 物实验 模 中华 肿 瘤 杂 志 年 月第 卷 第 期 ,, 型是评价 体内治疗效果的重要手段 ,而 目前 限制 性 内切酶 双酶切 。取 酶切 产 物 与 载样 液 常用 的小 鼠黑色 素瘤 细 胞 系对 感 染 的混合 液 各 ,用 微 量 移 液 枪 小 心 加 样 于 含 不 敏 感 。 因 此 ,我 们 将 疱 疹 病 毒 侵 入 介 体 琼 脂糖凝 胶 胶 板 的样 品槽 中 ,立 即 接通 电源 , (,)基 因 转 入 小 鼠 控制 电压在 左 右 。当溴 酚 蓝 条带 移 动 至 接 近 黑色素瘤细胞株 ,构建 易感 的小鼠黑 胶板 中线 时 ,停 止 电泳 ,观察 并拍 照 。通 过 观察琼脂 色素瘤 细胞 系 ,并通过体外和体 内实验来 糖凝 胶 电泳分离 得 到 的片段大小 来鉴 定 。 验 证 的抗 肿瘤效 果 。 细 胞 转 染 :以 转 染 试 剂 将 材 料与 方法 一

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