转录因子E2F1调控KIR3DL1基因表达的分子机制

作者:高晓宁;于力 刊名:中华血液学杂志 上传者:唐晓玲

【摘要】目的 研究转录因子E2F1对KIR3DL1基因启动子转录活性的影响,明确其调控KIR3DL1基因表达的分子机制.方法 采用PCR方法 从K562细胞基因组DNA中扩增突变型KIR3DL1基因启动子序列,将产物连接到pGL3-Basic荧光素酶载体,构建报告重组子;采用染色质免疫共沉淀方法 检测E2F1与KIR3DL1启动子在细胞内的结合;采用阳离子脂质体SuperFect包裹突变型和野生型KIR3DL1启动子-荧光素酶报告重组子,然后转染K562细胞,染色质免疫共沉淀方法 检测E2F1与重组子在细胞内的结合,双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性;将E2F1真核表达载体与野生型KIR3DL1启动子-荧光素酶报告重组子共转染K562细胞,双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性.结果 成功构建突变型KIR3DL1启动子-荧光素酶报告重组子,测序证实,在K562细胞KIR3DL1启动子区1个潜在的转录因子E2F1结合位点有1个自然发生的点突变(TTTGGCGC→TTCGGCGC);E2F1完全不能与K562细胞中突变型KIR3DL1启动子结合,但能与NK-92MI细胞中没有突变的野生型KIR3DL1启动子结合;突变型KIR3DL1启动子.荧光素酶报告重组子保留了部分与E2F1的结合能力,但其相对荧光素酶活性较野生型降低了50%;共转染E2F1真核表达载体使野生型KIR3DL1启动子-荧光素酶报告重组子的相对荧光素酶活性增加为对照组的2倍以上.结论 转录因子E2F1参与调控KIR3DL1基因转录激活,E2F1结合位点上CpG二核苷酸的数量和甲基化模式可能影响转录因子E2F1与靶序列的结合.

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· 806· 中华血液学杂志 2008年 12月第 29卷第 l2期 Chin J Hematol,December 2008,Vo1.29,No.12 转录因子 E2 F1调控 KIR3 DL1基 因 表达的分子机制 高晓 宁 于 力 【摘要】 目的 研究转录因子 E2F1对 KIR3DL1基 因启动子转 录活性 的影响,明确其调控 KIR3DL1基 因表 达 的 分子 机 制 。方 法 采用 PCR方 法 从 K562细胞 基 因组 DNA 中扩 增 突 变 型 KIR3DL1基因启动子序列 ,将产物连接到 pGL3一Basic荧光素酶载体 ,构建报告重组子;采用染色质免 疫共沉淀方法检测 E2F1与 KIR3DL1启动子在细胞内的结合;采用阳离子脂质体 SuperFect包裹突变 型和野生型 KIR3DL1启动子.荧光素酶报告重组子 ,然后转染 K562细胞 ,染色质免疫共沉淀方法检测 E2F1与重组子在细胞内的结合,双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性 ;将 E2F1真核表达载体与 野生型 KIR3DL1启动子。荧光素酶报告重组子共转染 K562细胞,双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素 酶活性。结果 成功构建突变型 KIR3DL1启动子一荧光素酶报告重组子,测序证实,在 K562细胞 KIR3DL1启 动子区 1个 潜在 的转 录 因子 E2F1结 合 位点 有 1个 自然 发 生 的 点 突变 (TrTGGCGC— TFCGGCGC);E2F1完全不能与 K562细胞中突变型 KIR3DL1启动子结合,但能与 NK一92MI细胞中没 有突变的野生型 KIR3DL1启动子结合;突变型 KIR3DL1启动子一荧光素酶报告重组子保留了部分与 E2F1的结合能力,但其相对荧光素酶活性较野生型降低了50%;共转染 E2F1真核表达载体使野生型 KIR3DL1启动子一荧光素酶报告重组子的相对荧光素酶活性增加为对照组的2倍以上。结论 转录因 子 E2F1参与调控 KIR3DL1基因转录激活,E2F1结合位点上 CpG二核苷酸的数量和甲基化模式可能 影响转录因子 E2F1与靶序列的结合。 【关键词】 基因,KIR3DL1; 转录因子,E2F1; 基因表达 M olecular regulation of KIR3DL1 gene expression by transcription factor E2F1 GAO Xiao—ning.】,f/ Li.Department ofHematology,General Hospital ofP ,Beijing 100853,China Corresponding author:YU Li,Email:chunhuiliyu@ yahoo.com 【Abstract】 Objective To study the role of transcription factor E2F1 in the transcription of KIR3DL1 promoter.and to identify its molecular mechanism of regulation of KIR3 DL1 gene expression.M ethods The mutant promoter fragment of KIR3DL1 gene was amplified fron genomic DNA of K562 cells by PCR. The PCR product was cloned into pGL3一bas

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