白及种子非共生培养高效萌发体系的研究

作者:陈菁瑛;万学锋;刘保财;赵云青;黄颖桢;张武君; 刊名:福建农业学报 上传者:吴绶镐

【摘要】以白及近成熟蒴果为材料,无菌播种于MS基本培养基上进行非共生培养研究,比较了播种法、播种量、贮藏法、光照及添加物等对种子萌发的影响,建立白及种子非共生培养高效萌发体系。结果表明:白及种子适宜采用5×10~3粒·mL~(-1)密度悬液法播种于MS培养基上,并在播种后前14d进行黑暗培养,萌发率达93%。添加10%土豆泥或椰汁能有效提高萌发率,促进原球茎的生长。塑料袋包装低温贮藏利于白及种子保存,贮藏60d仍有一半萌发。

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白及Bletilla striat为兰科白及属(BletillaRchb.f.)植物,为多年生宿根草本,地下部假鳞茎块根状,又称良姜、紫兰、甘根、连及草,为我国传统中药材[1-2],1977年以后各版《中国药典》均有收载。白及味苦、甘、涩,性微寒,归肺、肝、胃经,具有收敛止血,消肿生肌的功能,主要用于治疗咯血、吐血、外伤出血、疮疡肿毒、皮肤皲裂、肺结核咯血、溃疡病出血等[3-5]。现代研究发现白及块根含有近50种化合物[6],在医药、化工、食品等方面的应用前景十分广阔[7-12],综合利用潜力很大。近年来白及野生资源遭到了无限制采挖,加上生态环境的破坏,野生资源量急剧减少,价格也逐年攀升[13],已被我国列为珍稀濒危保护植物,同时也被列入《濒危动植物种国际贸易公约》(CITES)的附录Ⅱ中,受到国际保护,因此需要引导和开展人工栽培满足市场需求及保护野生白及资源。长期以来白及栽培以分割假鳞茎的方式进行繁殖,不仅繁殖系数低、周期长、耗种量大,且易导致病毒累积,经济效益不佳。白及种子非常细小且无胚乳,自然条件下萌发率极低,而种子非共生培养则能获得萌发,已有白及播种繁育种苗的研究报道[14-17],但关于白及种子非共生培养高效萌发体系的系统研究较少[18],高中南等[18]综述了白芨蒴果的贮藏及其消毒方法、非共生萌发的最适培养方法以及提高萌发率等研究进展,但相关研究有待进一步改进。为此,本研究比较了白及种子的播种方式、接种量、贮藏方法、光照条件及培养基添加物等对种子萌发的影响,旨在建立白及种子高效萌发的培养体系,为实现白及种苗的工厂化生产提供技术支撑。1材料与方法1.1材料白及蒴果采自中国医学科学院药用植物所北京药用植物园,并经林余霖研究员鉴定为白及Bletilla striat,系兰科白及属(Bletilla Rchb.f.)植物。1.2方法1.2.1蒴果的消毒处理将新鲜蒴果(除贮藏试验外)用75%的酒精浸泡0.5~1.0min后,置于10%的次氯酸钠溶液中消毒10min,再用无菌水冲洗4~5次后,用无菌手术刀将果荚前后端各切下1cm左右,再沿中间段纵切,然后用不同方法播种。1.2.2种子萌发培养经消毒的种子用悬液法(除播种法试验外)接种到MS添加土豆泥5%(除添加物试验外)的培养基上。培养基中均添加琼脂粉7g·L-1、白糖20g·L-1,pH 5.2~5.6。除光照度试验外,种子接种后置于温度(20±2)℃的黑暗条件下培养。萌发后统计萌发率,并转瓶继代培养。培养瓶采用650mL的兰花瓶。1.2.3播种法比较于蒴果表面消毒后进行。比较撒播法、涂布法和悬液法3种把种子接种到培养基表面的方法。撒播法指用无菌镊子夹住纵切后蒴果外壳的一端,将种子轻轻抖落到培养基表面,摇晃培养瓶利用培养基表面的少许水使种子尽可能分布均匀。涂布法指先向培养基上撒播种子,再滴入1~2滴无菌水,用药勺或涂布器涂布使种子尽可能分布均匀。悬液法指将种子抖落到一定量的无菌水中并轻晃瓶子使种子在无菌水中扩散均匀成悬浮液,再取悬浮液接种于培养基表面。1.2.4播种量比较将发育正常的一个蒴果种子悬浮于10、20、50和100 mL的无菌水中,分别获得的悬浮液称之为A、B、C和D悬浮液,含量大约为1×104、5×103、2×103和1×103粒·mL-1,然后用一次性注射器各吸取1 mL悬液种子接种于培养基上,轻晃培养瓶即可。1.2.5光照条件比较设黑暗与不同光照时间共3种处理,处理设置:L1为24h全黑暗培养,L2为光照度1 200~1 600lx下每日光照8~10h,L3为全黑暗培养15d后转

参考文献

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