microRNA-224在弥漫大B细胞淋巴瘤的表达及作用

作者:宋广玉;孙玲玲; 刊名:解剖科学进展 上传者:黄利英

【摘要】目的研究miR-224在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者中的表达与临床病理特征的关系,观察miR-224对弥漫大B淋巴瘤细胞系OCI-LY10增殖、侵袭能力的影响。方法收集86例DLBCL组织,并以22份无肿瘤细胞侵犯的正常淋巴结组织标本为对照,采用real-time PCR方法检测miR-224的相对表达水平,分析miR-224表达水平与患者临床病理特征的关系。对弥漫大B淋巴瘤细胞系OCI-LYl0进行miR-224反义寡核苷酸(ASO)转染并培养,MTT法检测细胞增殖能力,Transwell小室检测细胞侵袭能力,real-time PCR方法与Western blot方法检测细胞中bcl-2的表达水平。结果DLBCL患者淋巴瘤中miR-224表达水平显著低于正常淋巴结组织(P<0.05),miR-224在DLBCL患者中的表达与患者年龄、性别、疾病分期均无相关性(P>0.05)。miR-224ASO明显升高OCI-LYl0细胞的增殖侵袭能力,显著升高bcl-2蛋白与m RNA表达水平(P<0.05)。结论miR-224抑制OCI-LY10细胞增殖侵袭可能与下调bcl-2蛋白表达相关。

全文阅读

oma,DLBCL)是NHL中最常见的一种类型,约占NHL的30%-40%[3]。众多研究证实DLBCL是一组高度异质性的肿瘤,具有复杂的临床表现、形态学、免疫分型以及分子遗传学特征,因此对DLBCL分子生物学发病机制的深入研究对研判肿瘤生物学行为、实施分层治疗、个体化治疗、提高和监控疗效具有重要的意义。mi R-224是mi RNAs家族中被人们研究较多的一员,研究发现mi R-224在肝癌[4]、胃癌 非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma,NHL)是淋巴结和(或)结外部位淋巴组织的免疫细胞肿瘤,来源于淋巴细胞或组织细胞的恶变。国内外研究发现,其发病率近年来有逐渐上升的趋势[1,2]。而弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large Bcell lymph [5]、前列腺癌[6]、结直肠癌[7]等人类肿瘤中均异常表达,提示其可能在多种肿瘤的发生发展过程中发挥重要作用。目前,mi R-224在弥漫大B细胞淋巴瘤组织中的表达及相关作用研究较少。本研究旨在探讨mi R-224在弥漫大B细胞淋巴瘤组织中的表达、mi R-224对弥漫大B淋巴瘤细胞系OCI-LY10增殖、侵袭能力的影响及相关机制,为弥漫大B细胞淋巴瘤治疗提供新的思路。 1 材料与方法 1.1 临床资料 收集2015年2月至2016年6月在中国医科大学附属第四医院行手术治疗的86例DLBCL患者淋巴瘤组织,男55例、女31例,平均年龄62.1岁。以22份正常淋巴结组织标本为对照,所有病人术前均未进行放化疗治疗,均经病理学确诊,患者均签署知情同意书。 1.2 试剂与仪器 bcl-2抗体(Santa Cruz公司),二抗(北京中杉金桥公司),脂质体LipofectamineT M2000(美国Invi trogen公司),反义mi R-224寡核苷酸购自上海蓝基生物科技,总蛋白提取试剂盒(碧云天生物技术研究所),MTT细胞增殖检测试剂盒(南京凯基生物公司),CO2细胞培养箱(Thermo公司),7500荧光定量PCR仪(ABI公司)、酶标仪(Bio-Rad公司)。 1.3 细胞培养及ASO转染 弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞株OCI-LYl0用IMDM培养基,在37℃、饱和湿度的5%CO 2培养箱中培养。参照LipfectamineT M2000转染试剂盒说明书将反义mi R-224寡核苷酸转染至OCI-LYl0细胞,验证转染成功后再进行后续试验。反义mi R-224寡核苷酸相应序列:顺义链5'-AGUCACUAGUGGUUCCGU UUA-3',反义链5'-TAAACGGAACCACTAGTGACT-3',对照序列:顺义链:5'-UUCUCCGAACGUG UCACGUT-3',反义链:5'-ACGUGACACGUUCGGAG AAT-3'[8]。 1.4 实时荧光定量PCR 取出组织或细胞,细胞根据转染物的不同,将细胞分为mi R-224 ASO组和对照组,按照RNA提取试剂盒说明书提取组织或细胞中的总RNA,测定浓度,逆转录为c DNA,以合成的c DNA为模板,按照试剂盒说明书进行实时荧光定量PCR。实验结果采用2-ΔΔCt法进行表达量相对定量分析,以U6为实验内参,实验重复3次。 1.5 MTT法检测细胞增殖能力 收集OCI-LYl0细胞,将细胞悬液接种于96孔培养板(1×104个/孔),每组设有6个复孔,每孔加入5mg/ml MTT液20μl,在5%CO 2、37℃条件下继续孵育4 h,用酶标仪检测490 nm处的各孔吸光度值。 1.6

参考文献

引证文献

问答

我要提问