miR-17对靶基因转化生长因子受体β_2的负性调控表达

作者:赵洋;张魁;董然 刊名:《中华实用诊断与治疗杂志》 上传者:熊小英

【摘要】目的探讨miR-17在HEK293T细胞中对转化生长因子受体β2(transforming growth factor receptor beta 2,TGFRβ2)的调控作用。方法采用生物学信息预测软件对miRNA-17的靶基因进行预测,选定TGFRβ2为靶基因,构建pCDNA3.1+miRNA-17重组表达载体。将HEK293T细胞分为3组,分别为对照组(无转染)、空载组(转染空质粒)和miR-17组(转染pcDNA3.1-GW/EmGFP-miR-17质粒),3组采用实时定量PCR检测miRNA-17和TGFRβ2mRNA表达水平,采用Western blot检测TGFRβ2蛋白表达水平。将HEK293T细胞再分为3组,分别为CTL组(转染miR-17无义寡核苷酸序列)、miR-17组(转染pcDNA3.1-GW/EmGFP-miR-17质粒)和ASO-miR-17组(转染miR-17反义寡核苷酸序列),采用免疫荧光法检测各组TGFRβ2荧光强度。结果转染24h后,空载组和miR-17组HEK293细胞处于对数生长期,细胞突起和包体均正常,与对照组比较差异无统计学意义(P〉0.05);miR-17组miR-17表达量(5.391±0.053)明显高于空载组(1.654±0.075)与对照组(1.436±0.038),TGFRβ2mRNA和蛋白表达量(2.449±0.092、1.030±0.030)明显低于空载组(6.135±0.058、5.550±0.040)和对照组(6.862±0.074、5.090±0.030)(P〈0.05);ASO-miR-17组TGFRβ2荧光强度(1.144±0.079)明显高于CTL组(0.776±0.044)和miR-17组(0.917±0.096)(P〈0.05)。结论 miR-17可负性调节靶基因TGFRβ2的表达。

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中华实用诊断与治疗 杂志 2015年 2月第 29卷第 2期 J Chin Pract Diagn Ther,Feb . 2015,Vo1.29,N0.2 · 129 · · 论 著 · miR一17对靶基因转化生长因子受体 I】}2的负性调控表达 赵 洋 ,张 魁 ,董 然 (首都医科大学 附属北京安贞 医院 北京市心肺血管疾病研究所心脏外科 ,北京 100029) 摘 要 :目的 探 讨 miR一17在 HEK293T细 胞 中对 转化 生 长 因子 受体 B2(transforming growth factor receptor beta 2, TGFRI32)的调控作用 。方法 采用生物学信息预测软件对 miRNA一17的靶基 因进行预测 ,选定 TGFRI3 为靶基 因 ,构建 pCDNA3.1+miRNA一17重组表达载体 。将 HEK293T细胞分为 3组 ,分 别为对 照组 (无转染 )、空载组 (转 染空质 粒)和 miR一17组 (转 染 pcDNA3.1-GW/EmGFP—miR一17质粒 ),3组采用实 时定量 PCR检 测 miRNA一17和 TGFR~ mRNA 表 达水平 ,采用 Western blot检测 TGFRI3z蛋 白表达水平 。将 HEK293T细胞再分 为 3组 ,分别 为 CTL组 (转染 miR一17无 义寡核苷酸序列 )、miR一17组 (转染 pcDNA3.1一GW/EmGFP—miR一17质粒)和 ASO-miR一17组(转染 miR一17反 义寡核苷 酸序列),采用免疫荧光 法检 测各组 TGFRflz荧 光强度 。结果 转染 24 h后 ,空 载组和 miR一17组 HEK293细胞处 于对 数生长期 ,细胞 突起 和包体 均正 常 ,与对 照 组 比较 差异 无 统计 学 意义 (P>0.05);miR一17组 miR一17表达 量 (5.391 4- 0·053)明显高于空 载组 (1.654± 0.075)与对 照 组 (1.4364-0.038),TGFRfl2 mRNA 和蛋 白表 达量 (2.449±0.092、 1.0304-0.030)明显低于空载组 (6.1354-0.058、5.5504-0.040)和 对照 组 (6.8624-0.074、5.0904-0.030)(P< 0.05): ASP—miR一17组 TGFRI32荧光强度 (1.1444-0.079)明显高 于 CTL组 (0.7764-0.044)和 miR一17组 (0.9174-0.096)(P< 0.05)。结论 miR一17可负性调节靶基 因 TGFRI3z的表达 。 关键词 :miR-17;转化生长 因子受体 B ;HEK293T细胞 ;靶基 因 Negative regulation of m iR一17 to target genes transform ing growth factor receptor beta 2 ZHAO Yang,ZHANG Kui,DONG Ran (Department of Cardiac Surgery,Beijing Anzhen Hospital Affiliated to Capital Medical University,Beijing Institute of Heart,Lung and Blood Vessel Disease,Beijing 100029,China) Abstract:Objective To discuss the

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