靶向调控大鼠海马CNN3基因表达载体的构建及鉴定

作者:孙俊梅;龙晶晶;韩雁冰;蔡雪梅;陆地;边立功;郭家智;李梅 刊名:中国比较医学杂志 上传者:万爱群

【摘要】目的建立可调控大鼠局部脑区CNN3基因表达的技术,为进一步研究CNN3基因参与脑内病理生理过程奠定基础。方法设计并合成针对CNN3基因的全长编码序列c DNA和3条sh RNA干扰靶点序列,利用基因工程技术构建CNN3-OE和3个CNN3-sh RNA慢病毒载体,在立体定位仪引导下注入大鼠海马,采用蛋白免疫印迹技术筛选CNN3基因的最佳沉默序列,并找出重组表达和沉默慢病毒载体调控海马CNN3基因的变化规律。结果CNN3-OE和3个CNN3-sh RNA慢病毒干扰载体均构建成功,转染后8周内对海马CNN3基因水平均有一定调控作用,其中CNN3-sh RNA2载体组在转染后的8周内海马CNN3基因编码蛋白calponin-3水平均显著性下调,最高抑制率为73.26%;CNN3-OE慢病毒载体组中海马calponin-3蛋白水平具有统计学意义的升高仅在转染后第14天,上调率为93.88%。结论通过定位注射CNN3-OE和CNN3-sh RNA慢病毒载体可在体调控局部脑区CNN3基因表达,为后续的机制研究和开拓疾病防治新途径奠定基础。

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2016年 2月 第 26卷 第 2期 中国比较医学杂志 CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVE MEDICINE February,2016 Vol_26 No.2 靶 向调控大鼠海马 CNN3基因表达载体 的构建及鉴定 孙俊梅 ,龙 晶晶 ,韩雁冰 ,蔡 雪梅 ,陆 地 ,边立功。,郭家智。,李 梅 (昆明医科 大学第一 附属 医院 1.神经 内科 ;2.检验科 ,昆明 650031; 3.昆明医科 大学生物医学 工程研究 中心 ,昆明 650500) 【摘要】 目的 建立可调控大鼠局部脑区CNN3基因表达的技术,为进一步研究 CNN3基因参与脑内病理生 理过程奠定基础。方法 设计并合成针对 CNN3基 因的全长编码序列 cDNA和 3条 shRNA干扰靶 点序列 ,利用基 因工程技术 构建 CNN3一OE和 3个 CNN3一shRNA慢病毒 载体 ,在立体定位仪引导下注入 大鼠海马 ,采用蛋 白免疫 印 迹技术筛选 CNN3基 因的最佳沉默序列 ,并 找出重组表达 和沉默慢病 毒载体调控海 马 CNN3基 因的变化规 律。结 果 CNN3一OE和 3个 CNN3一shRNA慢病毒干扰载体均构建成功 ,转染后 8周 内对海马 CNN3基因水平均有一定 调 控作用 ,其中 CNN3一shRNA2载体组在转染后 的 8周 内海 马 CNN3基 因编码蛋 白 calponin一3水平 均显著性下 调 ,最 高抑制率为 73.26% ;CNN3-OE慢病毒载体组 中海马 calponin.3蛋 白水平具有 统计学意义 的升 高仅在转 染后第 14 天 ,上调率为 93.88% 。结论 通过定位注射 CNN3-OE和 CNN3一shRNA慢病毒载体可在体调控局 部脑区 CNN3基 因表达 ,为后续 的机制研究 和开拓疾病 防治新途径奠定基础 。 【关键词 】 CNN3;基 因;沉默 ;重组 ;慢 病毒 载体 【中图分类号】R一33 【文献标识码】A 【文章编号】1671—7856(2016)02-0055-07 doi:10.3969.j.issn.1671—7856.2016.02.012 COnstructi0n and identification of lentivirus.m ediated vectors targeting CNN3 gene in the rat hippocampus SUN Jun—mei ,LONG Jing-jing ,HAN Yah—bing。,CAI Xue.mei ,LU Di ,BIAN Li—gong ,GUO ia.Zhi ,LI Mei (1.Department of Neurology,2.Department of Clinical Laboratory, First Affiliated Hospital of Kunming Medical University,Kunming,65003 1,China; 3.Biomedical Engineering Research Center,Kunming Medical University,Kunming,650500) 【Abstract】 0bjective To establish a method focusing on regulation of CNN3 gene in the rat hippocampus and help to explore the role of CNN3 gene played

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