胃淋巴瘤Survivin表达与细胞凋亡及幽门螺杆菌感染相关性研究

作者:揭旭日;夏冰 刊名:右江医学 上传者:彭俊杰

【摘要】目的检测凋亡抑制基因Survivin在胃淋巴瘤组织中的表达,观察其与细胞凋亡及幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,HP)感染的相关性,探讨Survivin基因在胃淋巴瘤发病过程中的作用。方法应用TdT介导的dUTP缺口末端标记(TUNNEL)技术和免疫组织化学(Elivision)法观察30例正常胃粘膜组织,30例胃淋巴瘤组织中细胞凋亡和Survivin基因及HP感染阳性表达。结果胃淋巴瘤中Survivin基因表达阳性率为46.7%(14/30),而正常胃组织均无表达,两组比较有显著性差异(χ2=18.26,P<0.01)。Survivin表达与淋巴瘤分化程度、淋巴结转移及预后相关。胃淋巴瘤组织中HP阳性检出率为36.7%(11/30),正常胃组织检出率为23.3%(7/30),两者无显著性差异(χ2=1.27,P>0.05)。胃MALT型淋巴瘤Survivin阳性表达与HP感染有显著相关性(r=0.644,P<0.05)。胃淋巴瘤组织中细胞凋亡指数(apoptosisindex,AI)显著低于正常胃粘膜,胃淋巴瘤Survivin阴性表达组细胞凋亡指数与Survivin阳性表达组比较,差异有显著性(P<0.01)。结论Survivin基因在胃淋巴瘤中表达上调,而且与分化程度、淋巴结转移及预后有关。胃淋巴瘤与Survivin表达、细胞凋亡、HP感染有关。

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细胞凋亡是有核细胞在一定条件下受内在基因编程的调节,通过主动的生化过程而自杀的一种细胞死亡方式,它对生物机体的正常发育及自身稳定具有极其重要的作用。细胞凋亡功能的失控可引起机体平衡失调,导致一些相关疾病的发生,如肿瘤、心脑血管病等。胃肠道恶性淋巴瘤是常见的结外淋巴瘤,而胃是结外淋巴瘤最常发生的部位之一[1],临床上以中、晚期患者为主,细胞的分化程度、侵袭和转移是淋巴瘤复发并导致患者死亡的主要原因。如果能在分子水平上探索淋巴瘤侵袭转移相关基因的变化,寻找敏感、特异的预后指标,提供个体化的预后信息,对于临床及科学研究工作都有重大意义。Survivin是近年来发现的一种新的哺乳类抗凋亡因子,是凋亡抑制蛋白家族成员,主要通过抑制Caspase-3和Caspase-7活性而抑制细胞凋亡[2],但在成人终末分化组织基本不表达(胸腺,生殖腺除外)[3],同时也有研究认为胃淋巴瘤与幽门螺杆菌的感染有关,因此,应用凋亡相关基因Survivin、HP感染在胃肠道淋巴瘤的表达以及相关性研究,对胃肠道淋巴瘤的诊治具有重要的意义。材料与方法一、材料病例来源收集胃淋巴瘤30例,均为1998~2003年右江民族医学院第一附属医院及第二附属医院病理科存档蜡块,男性19例,女性11例,年龄38~72岁,平均年龄58岁,所有病例诊断前均未作任何针对性治疗。参照欧洲血液病理学会关于原发性胃肠道淋巴瘤的分类标准[1]分类,并行白细胞共同抗原(LCA)、CD45RO、CD20、CD3免疫组化染色。30例胃淋巴瘤均为B细胞性淋巴瘤,低度恶性胃淋巴瘤16例,其中胃粘膜相关淋巴样组织型(MALT型)淋巴瘤11例,中心细胞性淋巴瘤2例,套细胞性淋巴瘤3例;高度恶性胃淋巴瘤14例,其中MALT型淋巴瘤7例,间变性大细胞性淋巴瘤4例,免疫母细胞性淋巴瘤3例。按照胃肠道恶性淋巴瘤临床分期标准[1],期12例,期5例,期7例,期6例。本组实验中有淋巴结转移者18例,无淋巴结转移者12例。此外,取30例胃非恶性肿瘤的正常胃粘膜组织作为对照组。其中男性13例,女性17例,年龄20~63岁,平均年龄45岁,两组标本均经40g/L福尔马林固定,常规石蜡包埋。2.主要试剂与仪器(1)兔抗人Survivin多克隆抗体、碱性品红,购自福州迈新公司;(2)原位凋亡试剂盒,购自Roche公司;(3)微波炉。二、方法1.切片制作经石蜡包埋后制成4m石蜡切片7张,行常规HE染色,用于病理观察,其它用于免疫组化染色、HP感染检测和TUNNEL染色。2.Survivin免疫组化染色采用Elivision染色法。用已知的乳腺癌切片作为阳性对照,用PBS替代一抗作为阴性对照。(1)实验方法:切片、脱蜡、水化后,高温高压修复1次,时间为1分钟30秒,滴加过氧化氢消除切片中过氧化物酶对自身阳性的干扰,滴加一抗,37水浴1小时,滴加二抗,37水浴30min,DAB显色,苏木精复染,低度酒精脱水,干燥,二甲苯透明封固。用已知的乳腺癌切片作为阳性对照,用PBS替代一抗作为阴性对照。(2)Survivin染色及评价标准:参考美国AnzonaCancerCenter病理科及有关文件标准,在高倍镜(400)下至少5个随机视野中计数500个细胞,计算阳性细胞百分比。Sur-vivin阳性染色在胞浆或胞核均有表达,其中主要在胞浆中表达为淡黄至黄棕色颗粒。Survivin染色结果按阳性细胞所占百分率分为:阳性率<10%为阴性(-);10%~24%为弱阳性(+);25%~50%为阳性(++);>50%为强阳性(+++)。3.细胞凋亡TUNNEL法染色按原位

参考文献

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