糖尿病足溃疡动物模型的建立

作者:朱悦琦;程英升;李明华;谭华桥;赵俊功 刊名:上海交通大学学报(医学版) 上传者:陈芬

【摘要】目的建立一种简单、稳定和重复性好的犬糖尿病足溃疡模型,为干细胞移植的实验研究及临床血管内介入操作提供合适的模型。方法选用毕格犬6只,实验组(n=4)静脉注射四氧嘧啶,对照组(n=2)注射等量生理盐水,两组均行左下肢压迫器植入,同时手术结扎左侧股动脉,3~5 d后除去压迫装置。监测两组用药前后空腹血糖(FPG)及餐后2 h血糖(PG2h)、体质量和饮食的变化。术后1周和4周行数字减影血管造影(DSA)观察血管情况;4周后处死动物,行溃疡周围组织学检查。结果实验组模型制备成功,用药后FPG和PG2h均明显升高(P<0.05),体质量下降,饮食明显增加;而对照组FPG、PG2h、体质量和饮食用药前后均无统计学差异(P>0.05)。术后即刻两组溃疡形态无明显差异;术后4周对照组溃疡基本痊愈,实验组基本不愈合。DSA显示术后1周两组无明显差异;4周时,对照组可见大量新生血管形成,而实验组新生侧枝血管不丰富。组织学检查实验组可见大量坏死组织伴炎细胞浸润。结论该法制备的犬糖尿病足溃疡模型方法简单,成功率高,可以为干细胞移植基础研究以及临床介入血管内操作的研究提供稳定的模型。

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糖尿病足溃疡主要由下肢血管性病变引起,具有难治性、易复发和高截肢率等特点。目前,临床上针对糖尿病足溃疡还无很好的治疗方法,血管内介入治疗和干细胞移植治疗具有较好的临床应用前景[1-2]。然而,目前还没有一种可供上述研究使用的稳定的糖尿病足溃疡模型。本实验旨在建立一种稳定的犬糖尿病足溃疡模型,以供临床血管内治疗和干细胞移植治疗的研究之用。1材料与方法1.1动物和材料8~10月龄毕格犬6只,性别不限,体质量(123.1)kg,购自上海交通大学农学院教学实验实习场,生产许可证号:SCXK(沪)2002-0004,使用许可证号:SYXK(沪)2006-0010。四氧嘧啶(alloxan)(Sigma);快速血糖仪(Medisenseopti-um);自制压迫器[该装置由弹簧(最大压力147牛顿),螺栓(直径4mm40mm)螺帽(内径4mm,外径8mm)及压力片(直径5cm、2cm和1cm)组成;数字减影血管造影(digitalsubtractionangiography,DSA)机(Siemens,Axiom-Artis)。1.2建立模型1.2.1犬糖尿病模型建立:将6只毕格犬随机分为对照组(n=2)和实验组(n=4),实验组在5%戊巴比妥钠麻醉下,经前肢静脉缓慢推注50g/L四氧嘧啶(200mg/kg);对照组经前肢静脉推注等量生理盐水。1.2.2犬溃疡模型建立:6只毕格犬左侧后肢备皮,5%戊巴比妥钠全麻下右侧卧位消毒铺巾,皮肤切开约5cm,分离皮下组织,钝性分离浅层肌肉,植入金属垫板,分层缝合肌肉、皮下组织以及皮肤全层,然后安装皮肤表垫板和弹簧及螺母,调节螺母增加压力至49牛顿左右,每只犬共植入4枚压迫器。然后将犬仰卧位,消毒左下肢内侧皮肤,在股动脉搏动处切开皮肤,分离皮下组织,游离出股动脉后结扎股动脉主干及主要分支,缝合伤口。4~7d压迫器周围皮肤坏死后,压迫器可自行脱落或手术取下,形成溃疡。1.3监测血糖、体质量和饮食变化用药前2周和用药后2周均隔天记录犬空腹血糖(fastingplasmaglucose,FPG)、餐后2h血糖(PG2h)、进食情况以及体质量变化。1.4溃疡创面的观察及测量术后1、2、4周观察溃疡大小、创面肉芽组织及是否感染等。1.5数字减影血管造影技术(digitalsubtractionan-giography,DSA)检测术后1周和4周,6只犬全麻下右侧股动脉穿刺,引入6F导管鞘,DSA透视下5Fcorbra导管导丝引导下进入对侧髂动脉行左下肢DSA,完毕后拔管压迫止血10min。1.6组织病理学检查取溃疡周围组织,10%甲醛固定,石蜡包埋,HE染色,光学显微镜下观察。1.7统计学方法数据处理采用SAS6.12软件,两组间比较采用团体t检验,同组实验前后采用配对t检验,P<0.05表示有统计学差异。2结果2.1FPG、饮食及体质量变化实验组静脉注射四氧嘧啶后FPG由注药前的(2.960.43)mmol/L升高至(6.000.76)mmol/L;PG2h由注药前的(5.390.57)mmol/L升高至(8.481.79)mmol/L,均有明显的统计学差异(P<0.05)。对照组注射生理盐水前后FPG及PG2h无统计学差异(P>0.05)(表1)。实验组注射四氧嘧啶后进食及饮水量明显增加,体质量2周后较注药前平均下降(2.10.9)kg。两组注药前FPG和PG2h均无统计学差异(P>0.05),但注药后有显著性差异(P<0.01)(表1)。表1实验组和对照组血糖变化(xs,mmol/L)Tab1Bloodglucosechan

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