采后硅酸钠处理对苹果梨青霉病的抑制

作者:李云华;毕阳;张怀予;葛永红;刘瑾 刊名:甘肃农业大学学报 上传者:刘印华

【摘要】离体条件下,硅酸钠可抑制Penicillium expansum的菌丝生长,当浓度达到50 mmol/L时菌丝生长可被完全抑制.采用不同浓度的硅酸钠浸泡果实,可显著降低苹果梨损伤接种P.expansum的病斑面积,其中以200mmol/L的处理效果最好.硅酸钠处理可有效提高果实体内的过氧化物酶(POD)和多酚氧化酶(PPO)活性,促进过氧化氢(H2O2)和超氧化物阴离子(O2-)的产生,但对过氧化氢酶(CAT)和超氧化物岐化酶(SOD)活性的影响不大.由此表明,硅酸钠对梨果实青霉病的抑制与其的直接抑菌作用和诱导体内的抗性有关.

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苹果梨(Pyrusbretchneidericv.Pingguoli)是甘肃省特产果品,颇具市场声誉.苹果梨具有良好的耐贮性,但在贮藏后期仍然存在较高的腐烂率.苹果梨的腐烂与多种真菌有关,其中由扩展青霉(Peni-cilliumexpansum)引起的青霉病是其主要的采后病害[1].采用化学杀菌剂可有效控制果实的青霉病,但由于杀菌剂残留、环境污染及诱导病原物产生抗药性等问题使其应用逐渐受到限制.因此,亟需寻求一种更为安全有效的防腐措施[2].硅作为地壳中存在的第二大类元素,可用于采后病害的控制[3].据报道,采后硅酸钠处理可明显抑制哈密瓜的黑斑病、白霉病和粉霉病[15]、苹果梨黑斑病[4]以及马铃薯块茎的干腐病[5],但尚未见对苹果梨青霉病的应用报道,据此进行本试验研究.1材料与方法1.1材料供试苹果梨于2006年10月采自甘肃省条山国营农场,单果包纸,纸箱包装后运抵实验室,于室温(152)下贮藏待用;供试P.expansum分离自自然发病果实,PDA上保存待用.硅酸钠(NaSiO3),由天津市科密欧化学试剂开发中心生产,化学纯.1.2方法1.2.1苹果梨上的抑菌试验参照葛永红方法[6]并做修改.选择外观整齐,无病虫危害的苹果梨果实.配制不同浓度的硅酸钠溶液(0、50、100、200mmol/L),加0.01%Tween-80作为表面活性剂,浸泡果实10min,取出晾干待用,在温度20、RH85%~95%条件下贮藏,以清水处理为对照,在处理后进行接种试验.接种时,先用70%酒精擦拭果实表面进行消毒,再用灭菌铁钉在果实表面等距离刺孔3个(深3mm,直径2mm),1h后用微量移液器向每孔中注入20L(1106cfu/mL)扩展青霉(P.expansum)孢子悬浮液,每处理用果10个,重复3次.在温度20、RH85%~95%条件下贮藏.利用十字交叉法测量病斑直径,计算发病率和病斑面积.发病率(%)=(发病点数)/(总接种点数)100%病斑面积(mm2)=3.14(病斑直径/2)2.1.2.2离体抑菌试验将PDA培养基融化后冷却至45,加入用灭菌水配制的硅酸钠溶液,制备成改良的平板PDA培养基,分别含有0、12.5、25、50mmol/L的硅酸钠.待培养基冷却后用无菌打孔器在平皿中央打直径6mm孔,在孔中注入1106cfu/mL的扩展青霉(P.expansum)孢子悬浮掖20L,25下避光培养.当对照皿中菌体长至培养皿边缘时,测定菌斑直径(十字交叉法)并计算抑菌率,每个处理用9个培养皿,重复3次.抑菌率(%)=(对照菌落直径-处理菌落直径)/(对照菌落直径-原菌饼直径)100%1.2.3生化指标测定1.2.3.1取样参照CaoJK方法[7],对苹果梨进行损伤接种(方法同1.2.1),室温贮藏.分别于贮藏后1、3、5、7、9d用直径5mm打孔器取皮下2~5mm果肉组织,锡箔纸包裹,液氮冷冻后,低温(-80)保存待测.每个处理用果实10个,重复3次.1.2.3.2过氧化氢(H2O2)含量测定参考Prochazkova的方法[8],于410nm下测定溶液的吸光度值.以丙酮为空白参比,重复3次.按同样方法制作H2O2标准曲线,H2O2含量以nmol/g表示.1.2.3.3超氧化物阴离子(O2-)产生速率测定参照王爱国的羟胺法[9]并做修改,测D530nm值.同时以NO2-作标准曲线,O2-的浓度为NO2-的2倍,重复3次.O2-产生速率以nmol/(mgmin)表示.1.2.3.4粗酶液的提取取保存待测果肉组织3.0g于预冷的研钵中,加入3mL提取缓冲液(POD

参考文献

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