细胞周期素D1的表达与肺癌临床生物学特性的关系研究

作者:邱红;苏长青 刊名:临床肿瘤学杂志 上传者:于立君

【摘要】目的:研究细胞周期素D1(Cyclin D1)在肺癌中的表达及其与肺癌临床生物学特性的关系。方法:采用免疫斑点和免疫组化法对46例肺癌患者进行Cyclin D1检测。结果:Cyclin D1在肺癌中的表达高于正常肺组织,且与肺癌的分化和转移密切相关,与吸烟也有一定关系。结论:Cyclin D1的过表达在肺癌发生发展过程中可能起到重要作用。

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细胞周期素(Cmp)作为蛋白激酶复合体的调节亚基,可调控真核细胞周期的进程。高等真核生物细胞中Cmp共有A、B、C山和E五类,分别在细胞周期的不同时期累积,激活细胞周期素依赖性激酶的活性。D类Cpc又有、in和D3三个亚型,在细胞周期GI/S转换中起关键的调控作用人ap的表达促使细胞由m期进人S期。Capl最初被作为原癌基因而证实的,几年来的研究越来越说明Capl与肿瘤的发生发展密切相关。本文采用免疫斑点和免疫组化法,对肺癌中CghDI的表达进行研究,探讨CyclinDI与肺癌生物学行为的关系。1材料与方法1.l一般资料46例肺癌及远隔部位的正常肺组织,取自本院手术切除的新鲜标本,液氮保存。46例患者中,男41例、女5例,年龄42岁一刀岁。1.2免疫斑点法取样品sing,加300plSDS样品处理液,研磨成浆,100水浴10min,1000O离心10min,取卜清spl,滴加到尼龙膜(Amersham)上,风干,按以下步骤进行兔疫标记。10非免疫小牛血清封闭30min;1:lin鼠抗人CyclinDI单抗(福州迈新生物技术公司),4T过夜;Tris-HCIPH7.2洗sminx3次;二:100生物素-羊抗鼠IgG(福州迈新生物技术公司),371卜;同;1:lin链菌素亲生物素蛋白(福州迈新生物技术公司),37l小时;同;DAB显色,呈棕黄色者为阳性。回.3免疫组化法标本经福尔马林固定后,常规石蜡包埋切片,参照SP试剂盒(福州迈新生物技术公司产品)说明书进行免疫组化染色,细胞呈棕黄色者为阳性。免疫斑点和免疫组化法相互印证,结果不符者,进行重复实验,直至确定CmpDI是否真正阳性或阴性为止。2结果免疫组化法发现,CyclinDI的表达见于细胞核和细胞浆中,肺癌细胞CycllnDI含量明显高于正常肺组织(附图)。免疫组化及免疫斑点法对正常肺组织和肺癌CyclinDI的检测结果见表1。CyclinDI在肺癌中的表达与肺癌生物学特性的关系见表2。表ICyclinDI在肺组织及肺癌中的表达组别例数免疫斑点免疫组化正常肺4611(23.9)10(ZI.7)肺癌4632(69.6)”28(60.9)””注:。、。。与正常肺组相比较,P均<0.05表2CyclinDI与肺癌生物学特征的关系组别例数免疫斑点法阳性()组织学类型鳞癌2116(76.2)+腺癌1610(62.5)’/J细胞癌96(6.7)”分化程度高分化2010(50.0)a低分化2622(8.6)“淋巴结转移无转移198(42.门一有转移2724(88.9尸凸病灶大小一scm139(6.2)””>SCm肝转移3323(69.7)””吸烟情况>10年2118(8.7)n<5年及未吸烟者178(47.1)一注:。之间、。。之间比较,P均>0.05凸之问、八凸之问、八凸A之仰比较,尸<005附图肺腺癌CyclinDI阳性表达见于胞核胞浆(+),免疫组化X3003讨论CyclinDI基因定位于染色体llql3,全长15kb,含5个外显子,编码一由295个氨基酸组成的蛋白产物[l-。正常情况下,CycllnDI只是在期呈一过性表达,而在有丝分裂原或生长因于存在的情况下,CyclinDI可持续表达,表达的CyclinDI蛋白与CDK4结合,激活CDK4的蛋白激酶活性,促使Rb蛋白磷酸化,磷酸化失活的Rb蛋白释放出与之结合的转录因子EZF,导致DNA合成,促进细胞由GI期进人S期【‘,‘]。因此,CyclinDI的过表达可使细胞增殖人期缩短。已有研究表明,CycllnDI的扩增和过表达与乳腺癌、食管癌、胃癌、头颈部

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