细胞周期调控基因cyclin D1、p16与肺癌生物学特性的关系

作者:邱红;苏长青 刊名:实用癌症杂志 上传者:林琳

【摘要】目的 研究cyclinD 1基因的扩增和 p16基因的缺失与肺癌的关系。 方法 采用多重PCR方法 ,对 40例肺癌组织的cyclinD 1和 p16基因进行扩增。 结果 肺癌组织cyclinD1总阳性率为 5 5 .0 % ( 2 2 /4 0 ) ,p16总阳性率为 65 .0 % ( 2 6/4 0 ) ,两者扩增的阳性率与淋巴结转移和临床病理分期密切相关 ,随转移的发生和病程的发展 ,cyclinD1扩增阳性率升高而p16阳性率下降。 结论 cyclinD1和 p16基因在肺癌的发生发展中起着重要作用 ,cyclinD 1的扩增和 p16的缺失与肺癌细胞的高增殖活性密切相关。

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细胞周期失控是细胞异常增殖致癌变的重要原因[1]。细胞周期素1(1)是近年来提出的重要的原癌基因,在细胞周期调控中起关键作用[2]。16是新近分离出来的抑癌基因。16功能丧失或1过度表达都会导致4(周期素依赖性激酶4)对基因的调节障碍,使处于持续磷酸化状态,释放大量生长调节因子2,使细胞过度增殖而诱发肿瘤[3]。我们采用聚合酶链反应()技术,对40例肺癌标本的1及16基因进行扩增,探讨1基因的扩增与16基因的缺失与肺癌的关系。1材料与方法1.1病例资料40例肺癌标本来源于解放军81医院手术的肺癌患者,分别在肿瘤区及正常肺组织区取材,液氮保存。1.2标本处理参照等[4]的方法进行基因组提取。取液氮保存的标本,在未解冻时迅速用眼科剪剪碎,加入50/8.0溶液200(内含1%蛋白酶),42消化过夜,等体积酚/氯仿/异戊醇抽提,预冷无水乙醇沉淀,70%乙醇漂洗,溶解,作为扩增的模板。1.3引物设计根据1基因序列并参考文献设计1引物[5]。上游53,下游53,扩增产物长度152。根据16基因序列并参考文献设计16外显子1引物[6]。上游53,下游53,扩增产物长度为340。以上引物均由上海生物工程公司合成。1.4基因扩增以提取的基因组为模板,在同一反应管中同时扩增1基因和16基因。试剂盒购自第四军医大学全军基因诊断技术应用研究所。反应总体积为20,在扩增仪上(2400)进行如下反应:9520,5810,7230,35个循环后,72延长5后结束反应,取10反应产物,在1.5%琼脂糖凝胶上电泳分析。2结果2.11、16扩增结果及相关性肺癌1扩增的阳性率为55.0%(22/40),16阳性率为65.0%(26/40),其中1和16同时阳性占32.5%(13/40),1阳性而16阴性占22.5%(9/40),1阴性而16阳性占32.5%(13/40),1和16同时阴性占12.5%(5/40)。2种基因扩增一致者共18例(45.0%),不一致者22例(55.0%),两者相比有显著性差异。2.21、16与肺癌生物学特性的关系1和16扩增的结果及其与肺癌组织学类型、淋巴结转移及临床病理分期的关系见表1。表11和16基因与肺癌生物学特性的关系比较(例)分组例数1阳性例数(%)16阳性例数(%)组织学类型鳞癌1611(68.7)10(62.5)腺癌136(46.2)8(61.5)腺鳞癌41(25.0)2(50.0)小细胞癌74(57.1)6(85.7)与转移的关系无转移217(33.3)18(85.7)有转移1915(78.9)8(42.1)与临床分期关系期229(40.9)18(81.8)期1813(72.2)8(44.4)<0.05,<0.013讨论随着分子生物学技术的发展,细胞周期及其调控机制受到人们的广泛关注。许多研究证实,细胞周期调节失控是肿瘤发生的重要机制。在细胞周期1、、2、4个时期的转换过程中,存在着较为关键的关卡点,即1,这个卡点的转换受控于“1416”这个网络[2,5]。网络中4是核心调节因子。1和16都是通过调节4的活性而实现促进细胞增殖和抑制细胞分裂的作用。有实验证明,在人类乳腺癌、食管癌、胃癌、肝癌和头颈部鳞癌等多种肿瘤中都存在不等的1基因扩增或过表达,并伴随16基因的高频率失活。本组资料中,肺癌1扩增的总阳性率为55.0%(22/40),而且与肺癌淋巴结转移和临床病理分期密切相关。随着淋巴结转移的发生和疾病的发展,1扩增阳性率明显升高。结果提示,1作为潜在的肿瘤相关基因,其扩增倍数的升高是细胞高增殖活性的重要原因之一。40例肺癌16基因阳性率为6

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