阳离子脂质体/基因复合物解离动力学检测方法

作者:张树彪;赵轶男;朴永哲;海华;许晓东 刊名: 上传者:唐士英

【摘要】本分案申请涉及阳离子脂质体/基因复合物解离动力学检测方法。本发明通过琼脂糖凝胶电泳技术定性定量的分析阳离子脂质体与基因的解离过程;通过在复合物中加入荧光染料,建立荧光共振能量转移体系,采用荧光光谱技术检测阳离子脂质体与基因在细胞外及细胞内的解离过程,拟合其解离动力学曲线符合非线性方程。本发明公开的阳离子脂质体/基因复合物解离动力学的检测方法,适用于研究带正电荷的阳离子脂质体/基因复合物细胞外及细胞内解离动力学过程,拓宽了琼脂糖凝胶电泳技术、荧光光谱技术的应用,并为阳离子脂质体介导基因递送机制研究及进一步应用研究提供理论基础。

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(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201711358084.6 (22)申请日 2017.09.20 (62)分案原申请数据 201710857479.4 2017.09.20 (71)申请人 大连民族大学地址 116600 辽宁省大连市开发区辽河西路18号 (72)发明人 张树彪 赵轶男 朴永哲 海华 许晓东  (74)专利代理机构 大连智高专利事务所(特殊 普通合伙) 21235 代理人 祝诗洋 (51)Int.Cl. G01N 21/64 (2006.01) (54)发明名称 阳离子脂质体/基因复合物解离动力学检测 方法 (57)摘要 本分案申请涉及阳离子脂质体/基因复合物解离动力学检测方法。本发明通过琼脂糖凝胶电泳技术定性定量的分析阳离子脂质体与基因的解离过程;通过在复合物中加入荧光染料,建立荧光共振能量转移体系,采用荧光光谱技术检测阳离子脂质体与基因在细胞外及细胞内的解离过程,拟合其解离动力学曲线符合非线性方程。本发明公开的阳离子脂质体/基因复合物解离动力学的检测方法,适用于研究带正电荷的阳离子脂质体/基因复合物细胞外及细胞内解离动力学过程,拓宽了琼脂糖凝胶电泳技术、荧光光谱技术的应用,并为阳离子脂质体介导基因递送机制研究及进一步应用研究提供理论基础。 权利要求书1页 说明书5页 附图3页 CN 108169195 A 2018.06.15 CN 108169195 A 1.阳离子脂质体/基因复合物解离动力学检测方法,其特征在于,具体步骤如下: (1)阳离子脂质体与基因按照质量比6:1~1:1制备阳离子脂质体/基因复合物,加入竞争性结合剂与基因竞争性结合阳离子脂质体,采用琼脂糖凝胶电泳检测阳离子脂质体/基因复合物解离0~48h基因从复合物中的释放情况,分析阳离子脂质体解离基因的量; (2)根据步骤(1)制备阳离子脂质体/基因复合物,加入荧光染料与阳离子脂质体竞争性结合基因,建立荧光共振能量转移体系,使基因从复合物中解离,荧光染料与基因的质量比1:1~24:1,解离0~48h,采用荧光光谱测量基因从复合物释放不同时间后的发光强度;发光强度的检测条件为:激发波长260nm,发射波长600nm,激发狭缝为1nm,发射狭缝为 0.8nm,扫描范围为550-750nm。 2.根据权利要求1所述的阳离子脂质体/基因复合物解离动力学检测方法,其特征在于,所述阳离子脂质体为氨基酸型阳离子脂质体、肽型阳离子脂质体、单价季铵盐阳离子脂质体和双子型季铵盐阳离子脂质体。 3.根据权利要求1所述的阳离子脂质体/基因复合物解离动力学检测方法,其特征在于,所述基因包括质粒DNA、siRNA。 4.根据权利要求1所述的阳离子脂质体/基因复合物解离动力学检测方法,其特征在于,所述荧光染料为有机染料分子和溴化乙锭。 5.根据权利要求1所述的阳离子脂质体/基因复合物解离动力学检测方法,其特征在于,所述的竞争性结合剂为肝素钠或血清。 权 利 要 求 书 1/1 页 CN 108169195 A 2 阳离子脂质体/基因复合物解离动力学检测方法 [0001] 本申请为申请号为2017108574794、申请日为2017年9月20日、发明名称为“阳离子脂质体/基因复合物解离动力学检测方法”的分案申请。 技术领域 [0002] 本发明涉及阳离子脂质体非病毒基因载体领域,具体涉及阳离子脂质体/基因复合物解离动力学的检测方法。 背景技术 [0003] 基因治疗是通过载体向靶细胞或组织引入外源正常基因片段(D

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