独占春种子非共生萌发和低温离体保存

作者:罗远华;郭丽霞;莫饶;陈业渊 刊名:热带农业科学 上传者:吴巧玲

【摘要】独占春(Cymbidium eburneum Lindley)成熟种子无菌播种诱导原球茎,并以原球茎进行低温离体保存。结果表明:在培养基花宝1号3g/L+LH(水解乳蛋白)1g/L+BA(细胞分裂素)0.5 mg/L+NAA(生长素)0.1 mg/L+CM (椰子汁)100 ml/L+AC 2 g/L+蔗糖25 g/L中种子萌发出原球茎;原球茎在培养基1/2 MS+LH 0.5 g/L+BA 0.5 mg/L+NAA 0.1mg/L+AC 2g/L+蔗糖20g/L中于6℃黑暗条件下连续保存了20个月,成活率达85%,并能在恢复培养基MS+BA 3~5 mg/L+NAA 0.2 mg/L+AC 1g/L+CM 100 ml/L+蔗糖25 g/L中进行恢复增殖培养。

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独占春(价爪6idium。b“rneumLindley)是兰属(伪阴bidi“mSwartz)附生兰,其株型优美,花较大且有香气,是一种非常有开发利用价值的野生兰。由于热带雨林的不断破坏及人为的乱挖乱采,野生独占春资源损失严重,自然分布急剧减少。因此,采用植物组织培养技术建立独占春原球茎低温离体保存,对于其种质源资的保存与开发利用具有重要的意义。非共生萌发(无菌萌发)是以卡特兰(Cattlexa)与雷丽兰(Laelia)的杂交种子在无菌培养基上成功萌发而实现的[1],是兰科(Orchidaceae)植物种子萌发的主要方法。植物种质资源离体保存方法主要有超低温和低温2种。Homes等首先报道了兰属植物原球茎的低温保存[z1。目前,在兰属、石解兰属(DendrobiumSwartz)、香夹兰属(VanillaMiller)、苞舌兰属(SPath哪orrisBlume)、万代兰属(V田l泛2。R.Brown)、白及属(BlerillaReiehenbaehf.)等上开展了种质资源的离体保存研究[2J。我国学者张治国、2007年8月热带农业科学第27卷第4期王君晖及史永忠等分别报道了铁皮石解种子、原球茎超低温保存以及试管苗的低温离体保存2一5。宋锡金等也报道了金钗石解种子的萌发以及种质保存[61。独占春无菌播种及原球茎的低温离体保存尚未见报道。本研究以独占春种子无菌萌发得到的原球茎为材料,建立了独占春原球茎低温离体保存技术。15001x培养12~15d;置入12黑暗中培养3~sd;置人6黑暗中保存。1.2.4恢复增殖培养材料保存数月后于常规条件下培养3~sd,转接到恢复增殖培养基中进行增殖培养。培养温度(26士2),光照时间12~巧h/d,光照强度为1500一200lx。1材料与方法1.1材料1.1.1植物材料独占春成熟种子。1.1.2培养基1.1.2.1原球茎诱导培养基花宝1号39/L+LH(水解乳蛋白)19/L+BA(细胞分裂素)0.5mg/L+NAA(生长素)0.1mg/L+CM(椰子汁)100ml/L+AC(活性炭)29/L+蔗糖259/L+卡拉胶8.59/L,pH5.4~5.6。1.1.2.2原球茎低温保存培养基l/ZMS、MS、花宝l号3种培养基,均附加0.5mg/LBA、0.1mg/LNAA、29/LAC、0.59/LLH、209/L蔗糖,pH5.4~5.6。1.1.2.3恢复增殖培养基MS+BA3一5mg/L+NAA0.2mg/L+AC19/L+CM100ml/L+蔗糖259/L+卡拉胶69/L,pH5.4~5.6。1.2方法1.2.1种子的消毒及无菌接种将成熟但未开裂的茹果用自来水冲洗表面后,在超净台上用手术刀削除病斑,用75%(v/v,下red)的酒精擦洗表面,然后置人95%的酒精中浸泡数秒后取出灼烧灭菌,以表面酒精烧干即可,重复2~3次。1.2.2原球茎的诱导将消毒好的茹果切开,将种子均匀播洒在原球茎诱导培养基上培养。培养温度(26士2),光照时间10~12h/d,光照强度1000一1500lx。1.2.3原球茎低温保存将诱导出的正常生长的原球茎接种在低温保存培养基上培养。常规条件温度(26士2),光照一42一2结果与分析2.1原球茎的诱导成熟种子具有较高的萌发率,在接种约90d后能诱导出原球茎,且萌发率达95%以上。适量添加CM和低浓度的BA、NAA有利于种子胚胎发生形成原球茎。AC的加人能有效防止褐化的发生。2.2原球茎低温保存独占春原球茎在1/ZMS培养基上于6黑暗中能连续保存20个月以上。原球茎能缓慢增殖,呈绿色、浅绿色或白

参考文献

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