双报告基因真核表达载体的构建及其功能鉴定

作者:赵智凝;周强;李艳君;郭振军;何芙蓉 刊名:现代生物医学进展 上传者:熊小英

【摘要】目的:构建绿色荧光蛋白和海肾荧光素酶共同高效表达的双报告基因真核表达载体。方法:将增强型绿色荧光蛋白基因和海肾荧光素酶基因以昆虫病毒T2A序列相连接而后克隆进入pcDNA3.1(-)质粒,构建双报告基因真核表达载体。将该载体转染至COS-7细胞,通过荧光显微镜观察、照度计定量分析检测绿色荧光蛋白和海肾荧光素酶生物活性,Western Bolt检测T2A序列自剪切效率。结果:双报告基因真核表达载体能够同时表达非融合的绿色荧光蛋白和海肾荧光素酶,与单独表达载体产物具有相似的生物活性和表达效率。结论:双报告基因真核表达载体建立成功,为基因表达调控等相关领域研究提供辅助工具。

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现代生物医学进展 www.shengwuyixue.eom ProgressinModernBiomedicine VokI4 NO.23 AGU.2014 ·4413· doi:10.13241/j.cnki.pmb.2014.23.004 双报告基因真核表达载体的构建及其功能鉴定 冰 赵智凝 周 强 李艳君 郭振军 何芙蓉 (1解放军第四五一医院 陕西 西安 710054;2解放军第四军医大学 口腔医院 陕西 西安 710032) 摘要 目的:构建绿色荧光蛋白和海’肾荧光素酶共同高效表达的双报告基因真核表达载体。方法:将增强型绿色荧光蛋白基因和 海肾荧光素酶基因以昆虫病毒 T2A序列相连接而后克隆进入 pcDNA3.1(一)质粒,构建双报告基因真核表达载体。将该载体转染至 COS 7细胞 ,通过 荧光显微镜观 察、照度计 定量分析检 测绿 色荧光蛋 白和海 肾荧光 素酶生物活性 ,Western Bolt检 测 T2A序 列 自 剪切效率。结果:双报告基因真核表达载体能够同时表达非融合的绿 色荧光蛋白和海肾荧光素酶,与单独表达载体产物具有相似 的生物活性和表达效率。结论:双报告基因真核表达载体建立成功,为基因表达调控等相关领域研究提供辅助工具。 关键词 :报告基因;荧光蛋白;荧光素酶;T2A序列 中图分类号:Q75。Q78 文献标识码:A 文章编号:1673-6273(2014)23-4413·04 Constructing and Functiona1 Analysis Of the Expression Vector with Double Reporter Genes* ZHA0Zhi-ningl,ZHOUQian~,LI Yan-jun1,GUOZhen-jun1,HEFu-ron~ (1 ClinicalLaboratory,451 hospi~lofChinese PLA Xi'na,ShaanxL 710054,China;2DepartmentofGeneralDentistryandEmergency, College ofStomatology,FourthMilitaryMedical UniversiO,,Xi~n,ShaanxL 710032,China) ABSTRACT Objective:To construct an expression vector with double reporter genes of green fluorescent protein and renilla luciferase.Methods:Enhanced green fluorescent protein and renilla lucifemse gene were linked by T2A sequences of insect virus.Then the sequences were cloned into pcDNA3.1(-)plasmid to obtain the expression vector.The vector was transfected into Cos-7 cell line.The morphological changes of Cos-7 cells were observed under microscope.Illuminometer was used to analyze the bioactivity of rgeen fluorescent protein and ren

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