类风湿关节炎患者外周血IL-25的表达及临床意义

作者:唐宏勇;李忆农;洪春梅 刊名:新医学 上传者:龚滨

【摘要】目的检测类风湿关节炎(RA)患者外周血IL-25和IL-17表达水平,同时分析其与临床指标及疾病活动度评分(DAS28)的关系,初步探讨IL-25在RA中的临床意义。方法收集年龄大于16岁的80例RA患者及30名健康志愿者外周血标本并分组,DAS28>3.2为RA活动组,DAS28≤3.2定义为RA低缓组,并进行双手关节X线Sharp总分评分及健康评估问卷(HAQ)调查;采用实时荧光定量(QRT)-PCR检测外周血单个核细胞(PBMC)中的IL-25和IL-17的mRNA表达水平,ELISA检测血清IL-25、IL-17的蛋白浓度,并分析其与临床指标的关系;采用单因素方差分析、Spearman或Pearson相关分析和多元回归分析进行统计学处理。结果 RA活动组患者血清IL-25和IL-17蛋白浓度高于RA低缓组和健康组(P<0.01),RA低缓组与健康组比较差异无统计学意义(P均>0.05)。RA活动组患者PBMC中IL-25和IL-17的mRNA表达水平均高于RA低缓组和健康组(P均<0.01),低缓组与健康组比较差异无统计学意义(P均>0.05)。RA活动组患者血清IL-25的蛋白浓度与CRP、ESR、RF、抗CCP抗体、DAS28、Sharp总分、HAQ评分均呈正相关(P<0.01),外周血IL-25 mRNA的表达水平亦与上述指标呈正相关(P<0.05)。RA患者外周血IL-25的mRNA表达水平及蛋白浓度与IL-17相应水平有关(b=0.748,P<0.01;b=0.843,P<0.01)。结论 IL-25有可能参与RA的免疫炎症反应,亦有可能作为RA活动性参考指标之一。

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类风湿关节炎(RA)是一种以慢性关节滑膜炎症为特征的自身免疫性疾病。在我国,RA的患病率为0.32%~0.36%,是造成人类劳动力丧失和致残的主要因素之一[1]。RA发生、发展中受到诸多因素的影响。细胞因子网络失衡在RA的发生、炎症的迁延及关节的破坏中占有重要的地位,是近年的研究焦点。IL-25是新近发现的IL-17家族成员,属于辅助性T细胞2(Th2)类细胞因子,主要由Th2细胞及肥大细胞分泌,又称为IL-17E,可促进IL-4、IL-5、IL-13等因子的分泌,亦可通过诱导IL-6、IL-8等前炎症因子参与RA炎症损伤,在过敏性哮喘、炎症性肠病(IBD)、自身免疫性脑脊髓膜炎(EAE)等疾病中发挥着重要作用。IL-17在RA发病过程中所起的作用备受关注,其可诱导炎症因子TNF-的分泌,并可上调或下调IL-25的表达水平[2]。新近胶原诱导性关节炎模型(CIA)研究表明,IL-25在脾脏、上清液、滑液中的表达水平持续上升,而IL-17的表达水平在疾病早期升高,中后期出现下降趋势,这表明IL-25在CIA中后期可抑制IL-17的分泌,从而参与调节RA的免疫炎症反应[3]。然而此研究仅局限于动物研究模型,尚未见临床研究报道。本研究拟检测RA患者外周血中的IL-25及IL-17的表达水平,并进行临床资料分析,初步探讨IL-25在RA发病中的可能机制和作用,现报告如下。对象与方法一、研究对象2012年10月至2013年10月我科病房及门诊收治的80例RA患者,均符合1987年美国风湿病学会(ACR)或2010年ACR/欧洲风湿病联盟(EULAR)的RA分类诊断标准。其中男12例,女68例;年龄22~78岁,中位年龄45岁;病程6个月至18年,中位病程5年。按照患者的RA疾病活动指数(DAS28)分为DAS28>3.2组(RA活动组)、DAS283.2组(RA低缓组)。同时收集我院同期门诊与实验组无血缘关系的健康体检者30名为健康组,其中男6名,女24名,年龄26-65岁,中位年龄48岁。排除严重心脏病、糖尿病、肿瘤、炎症性肠病等疾病的RA患者及健康人群,且近期内无严重感染性疾病。RA组和对照组的年龄、性别构成等比较差异无统计学意义(P>0.05)。本研究已通过我院伦理委员会批准,所有受试者均签署知情同意书。二、主要试剂与仪器主要试剂有:人淋巴细胞分离液(天根生化科技有限公司),Trizol(美国Invitrogen公司),RevertAidFirstStrand模板DNASynthesisKit[罗氏生物(上海)有限公司],SYBRGreenERqPCRSuperMix[宝生物(大连)工程有限公司],人IL-17、IL-25ELISA试剂盒(上海生工生物工程有限公司)。主要仪器有:全自动酶联免疫检测仪、荧光定量PCR仪(美国BIO-RAD公司)。三、方法1.标本的处理于清晨抽取受试者空腹静脉血3ml于促凝管,室温静置2h后,以低速离心15min,取上清于-70冰箱保存备用。另抽取各组患者空腹静脉血5ml于乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管冷冻保存。Ficoll密度梯度离心法分离PBMC,加Trizol提取液1~2ml,置于-70冰箱保存备用。2.RNA的提取和模板DNA的合成所分离的PBMC使用传统Trizol法提取总mRNA,样品A260/280比值在1.7~1.9。常规合成模板DNA,样品A260/280比值在1.8~2.0,-70冻存备用。3.PBMC中IL-25、IL-17的mRNA表达水平及目的基因检测实时荧光定量(QRT)-PCR法检测孵育PB

参考文献

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