CRH、UⅠ和UⅡ基因在斑马鱼发育早期的表达谱

作者:罗蕾;陈阿琴;吕为群 刊名:上海海洋大学学报 上传者:张想宏

【摘要】促肾上腺皮质激素释放激素(Corticotropin-releasing hormone,CRH)、尾加压素Ⅰ(UrotensinⅠ,UⅠ)和尾加压素Ⅱ(UrotensinⅡ,UⅡ)广泛存在于脊椎动物中。在鱼类中,它们在渗透压调节、繁殖、营养代谢以及应激反应中发挥着重要作用。本研究中,通过收集0、1.5、3.7、5.3、8、10、16、24、48、72、96、120和144 hpf(hours post-fertilization)的斑马鱼早期发育样品,运用荧光定量PCR技术进行检测发现CRH、UⅠ、UⅡα和UⅡβmRNA从0 hpf开始存在表达,而且CRH、UⅠ、UⅡα和UⅡβ的表达量随发育而逐渐增加,并分别在120 hpf或144 hpf达到最高水平。相关性分析揭示在斑马鱼早期发育过程中,CRH、UⅠ、UⅡα和UⅡβmRNA的表达水平两两之间呈现极显著正相关,这表明CRH、UⅠ、UⅡα和UⅡβ在斑马鱼早期发育过程中关系紧密并且相互合作发挥作用。

全文阅读

促肾上腺皮质激素释放激素(Corticotropin-releasinghormone,CRH)、尾加压素(Urotensin,U)和尾加压素(Urotensin,U)广泛存在于脊椎动物中[1-4]。在硬骨鱼类中,其特有的神经内分泌结构尾部神经分泌系统(Caudalneurosecretorysystem,CNSS)是CRH、U和U的主要表达和分泌场所[3,5-9]。这些肽类激素在渗透压调节、繁殖、营养代谢以及应激中发挥着重要作用[7-11]。CRH由41个氨基酸残基组成,是小分子肽类激素,最早从绵羊的下丘脑中分离提纯得到[12]。不同种属间CRH具有较高的同源性,人与大鼠的CRH相同,与羊的CRH仅有7个氨基酸不同。U由41个氨基酸残基组成,属于CRH超家族,该家族还包括两栖动物中40个氨基酸的蛙皮降压肽和哺乳动物中U直系同源物尿皮质激素[4,8,11,13]。U最早是从白亚口鱼(Catostomuscommersoni)的尾垂体提取物中分离获得[14]。U是一种含有12个氨基酸的环肽,C末端的第6位和第11位的半胱氨酸残基间通过二硫键形成环形结构[15]。最早U是从长腭泥虾虎鱼(Gillichthysmirabilis)的尾垂体中发现并被分离出来[16-17]。随后的研究发现U广泛存在于从七鳃鳗到人类的整个脊椎动物中,并且6个氨基酸组成的环形序列是高度保守的(Cys-Phe-Trp-Lys-Tyr-Cys),这也被认为是U的生物活性中心[1,16,18-23]。在鲤科鱼类中U存在多种亚型,如鲤U具有4个亚型[24],斑马鱼中U存在两种亚型,即U和U[25]。目前关于CRH、U和U基因的研究大多都集中在成鱼基础上,但对于它们在鱼类发育过程中的生理功能与作用机制的研究还相对缺乏。本研究利用模式生物斑马鱼探讨了CRH、U、U和U在早期发育过程中的表达模式,为深入研究CRH、U、U和U的生理功能及调控机制提供基础资料。1材料与方法1.1实验材料实验动物为Tubingen品系斑马鱼(Daniorerio),源自中国海洋大学段存明实验室,培养在海圣的自动循环水养殖系统中,光照黑暗比为1410。胚胎通过正常交配获得,在28胚胎培养液中控光培养,按照KIMMEL等[26]的描述对其发育时期进行鉴定,收集0、1.5、3.7、5.3、8、10、16、24、48、72、96、120和144hpf(hourspost-fertilization)的斑马鱼发育样品。1.2实验方法1.2.1引物设计根据NCBI中斑马鱼CRH(NM_001007379)、U(NM_001030180)、U(NM_212848)和U(NM_205591)的基因序列,使用PrimerPremier5.0软件设计qPCR引物,-actin(AF057040)基因作为内参基因,引物全部由上海生工公司合成(表1)。表1基因引物序列Tab.1Primerpairsequencesusedforreal-timeqPCRamplifications基因序列(5'3')CRHF:GCCGCGCAAAGTTCAAAAR:GCGAGGAGAATCTGTGCGTAAUF:CACGCTTCCTCACCGCTACTR:TCAATGGGACGGGCTTCAUF:GCAGCCGCAGCACATTCR:CAAAAGACCACTGGGAGGAACUF:AGTCGGCGGAGATGAGCTTR:GCGGCATCATGGGAGAGATA-actinF:GCTGCCTCTTCTTCCTCCR:ATGTCCACGTCGCACTT

参考文献

引证文献

问答

我要提问