茶树八氢番茄红素脱氢酶cDNA全长克隆与表达分析

作者:李娜娜;邵文韵;刘畅;陆建良;梁月荣 刊名:茶叶 上传者:黄燕萍

【摘要】八氢番茄红素脱氢酶是类胡萝卜素生物合成途径的关键酶之一。本实验采用3'/5'RACE和RTPCR技术成功扩增出茶树八氢番茄红素脱氢酶基因(PDS)的3'端和5'端序列,序列拼接获得全长cDNA序列,命名为CsPDS,并将其登录至GenBank,登录号KF646537。经生物信息学分析,所得基因cDNA序列全长为2295 bp,开放阅读框(ORF)1749 bp,编码582个氨基酸,预测分子量约为64.86 kDa,理论等电点(PI)为6.77,属于亲水性蛋白。该基因编码的氨基酸序列与柿树PDS序列的同源性达到87%,多序列比对表明茶树PDS具有高度保守区域,基于邻接法的进化树显示与柿树、葡萄的亲缘关系最近。实时荧光定量PCR分析结果显示,CsPDS在‘黄金芽’体内表达没有受抑制,表明‘黄金芽’黄色白化可能不是在CsPDS基因转录水平异常而引起。

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茶 叶 Journal of Tea 2014,40(2):69~74 茶树八氢番茄红素脱氢酶 cDNA 全长 克隆 与表达分析 李娜娜 邵 文韵 刘 畅 陆建 良 梁月荣 (浙江 大学茶 叶研究所 ,浙江 杭州 310058) 摘 要 八氢番茄红素脱氢酶是类胡萝 卜素生物合成途径的关键酶之一。本实验采用 3 /5 RACE和 RT· PCR技术成功扩增出茶树八氢番茄红素脱氢酶基因(PDS)的3 端和 5 端序列,序列拼接获得全长 cDNA序列,命 名为 CsPDS,并将其登录至 GenBank,登录号 KF646537。经生物信息学分析 ,所得基因cDNA序列全长为2295 bp, 开放阅读框(ORF)1749 bp,编码 582个氨基酸 ,预测分子量约为 64.86 kDa,理论等电点(PI)为 6.77,属于亲水性 蛋白。该基因编码的氨基酸序列与柿树 PDS序列的同源性达到 87%,多序列 比对表明茶树 PDS具有高度保守区 域 ,基 于邻接法 的进 化树显示 与柿树 、葡萄 的亲缘 关 系最 近。实时 荧光 定量 PCR分 析结 果显 示 , PDS在 ‘黄金 芽 ’体 内表达没有受 抑制 ,表 明 ‘黄金芽 ’黄色 白化可能不是在 CsPDS基因转录水平异常而引起 。 关键 词 茶树;八氢番茄红素脱氢酶 ;cDNA末端快速克隆 ;序列分析;表达分析 中图分类号:$571.1;Q812 文献标识码:A 文章编号:0577—8921(2014)02—069-06 Cloning of a full·length cDNA of phytoene desaturase gene in tea plant(Camellia Sinensis)and its expression LI Nana,SHAO W enyun,LIU Chang,LU Jianliang,LIANG Yuerong (Zhejiang University Tea Research Institute,Hangzhou 310058,China) Abstract Phytoene desaturase is one of the key enzymes involving in carotenoid biosynthetic pathway.3 /5 RACE and RT—PCR methods were used to amplify the 3 一and 5 ·end sequence of phytoene desaturase gene(PDS)from tea plant.A full-length cDNA sequence of the gene was obtained after sequence splicing,which was named as CsPDS,with a GenBank accession number KF646537.Its bioinformatie characterization indicated that the full length cDNA of CsPDS was 2295 bp, which contained an open reading frame of 1749 bp and encoded 582 amino acids with a putative molecular mass 0f 64.86 kDa and a theoretical isoelectric point of 6.

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