高效液相色谱法测定熟肉制品中的合成色素

作者:扎西穷达;任奉莹;李辉;曹叶伟;刘吉爱 刊名:西藏科技 上传者:艾荟萃

【摘要】目的建立灵敏度高、操作简单的高效液相色谱法测定熟肉制品中柠檬黄、日落黄、胭脂红、诱惑红等合成色素。方法样品经涡旋离心等提取,得出最佳色谱条件,注入高效液相色谱仪进行分离。结果在选定的分离条件下4种色素在0.0-60.0ug/ml范围内线性关系良好,相关系数均≥0.9995。准确度试验,回收率在89.0%-109.5%。结论方法简单易操作,应用于实际样品的测定,结果满意。

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最近熟肉制品加工过程中有的添加人工合成色素,而人工合成色素有致癌作用,而且成本低,着色力强,大大危害人们身体健康。目前GB/T5009.35-2003《食品中合成着色剂的测定》针对熟肉制品专属性不强,往往熟肉制品中脂肪、蛋白质含量高,提取时影响样品提取效果,不能提取完全,回收率低,在大量批检测任务,前操作繁琐,增大工作量。文章在原有的标准基础上探讨了熟肉制品中合成色素测定加以改进前处理方法和测定条件,获得满意结果。1材料与方法1.1仪器1.1.1Agilent1100型高效液相色谱仪,带紫外检测器1.1.2天平1.1.3涡旋混匀器1.1.4离心机1.1.5具塞离心管50ml1.1.6容量瓶5ml1.1.7超声波清洗仪1.1.80.45um微孔滤膜1.2试剂1.2.130-60石油醚(分析纯)1.2.2无水乙醇(分析纯)1.2.3氨水(分析纯)1.2.4亚铁氰化钾溶液1.2.5乙酸锌溶液1.2.6乙腈(色谱纯)1.2.7乙酸铵溶液(0.02mol/L)1.2.8冰乙酸(分析纯)1.2.9柠檬黄、日落黄、胭脂红、诱惑红标准储备液:0.5mg/ml(中国计量科学研究院)1.3分析方法1.3.1色谱条件色谱柱:C18,4.6150mm,5um,检测波长:254nm,柱温:30,流速:1.0ml/min,进样量:10ul,流动相:乙腈+0.02mol/L乙酸铵溶液(8+9220+80)1.3.2标准系列制备分别精密吸取柠檬黄、日落黄、胭脂红、诱惑红标准储备液,用去离子水制成浓度为0.0、1.0、5.0、10.0、20.0、40.0、60.0ug/ml的混合标准曲线溶液。1.3.3样品前处理称取已粉碎均匀的试样5.00g,放入50ml离心管中,加入石油醚20ml,涡旋2min混匀,弃去石油醚层,反复提取2次,挥尽石油醚,再加20ml无水乙醇-氨水-水(721),涡旋30s,超声处理20min,加入亚铁氰化钾溶液、乙酸锌溶液各2.5ml,涡旋1min,离心(4000r/min)5min,取上清液置蒸发皿中,用冰乙酸调PH到7,水浴蒸至近干,加水溶解,定容到5ml容量瓶,混匀。经0.45um滤膜滤过进高效液相色谱仪。2结果与讨论2.1样品前处理方法探讨熟肉制品中脂肪、蛋白质的含量较高,用GB/T5009.35-2003方法提取效率较低,能够减少干扰充分提取合成色素,选择先加入石油醚去除脂肪后,加入无水乙醇-氨水-水(721)提取合成色素,再分别加入亚铁氰化钾溶液、乙酸锌溶液2.5ml沉淀蛋白质,样品处理中出现沉淀为好,将涡旋混匀后离心。经过多次不同熟肉制品样品来试验证明前处理方法效果好,回收率高。2.2高效液相色谱的选择71流动相乙腈+0.02mol/L乙酸铵溶液(8+9220+80)将更好分离四种合成色素。流速快慢,影响出峰时间长短,选定流速为1.0ml/min。色谱条件为:检测波长254nm,柱温30,流速1.0ml/min,进样量10ul。色谱柱:C18,4.6150mm,5um。该色谱条件下得到的色谱图如下2.3标准曲线情况选用上述高效液相色谱条件将四种合成色素混合标准液进行分析,得到浓度X和峰面积Y之间的工作曲线,相关系数均大于0.9995。最低检出浓度柠檬黄为0.13mg/kg,日落黄为0.048mg/kg,胭脂红为0.12mg/kg,诱惑红为0.025mg/kg。2.4回收率实验选用一个未添加过任何合成色素样品为空白,分别加入标准溶液浓度5.0,20.0,60.0ug/ml,按1.3.3处理后用上述色谱条件测定其浓度,每个浓度分别测定3次,回收率及

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