耐盐碱抗烟草黑胫病木霉菌株的筛选与鉴定(无全文)

作者:崔西苓;李世贵;杨佳;樊祥臣;顾金刚 刊名:中国农业科技导报 上传者:

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【摘要】采用稀释平板涂布法,从天津市和河北省地区采集的48份盐碱土中分离筛选得到20株耐盐碱木霉菌株,在含8%NaCl,pH 8.0的PDA培养基中培养7 d,菌落直径达1.0~5.9 cm。通过平板对峙培养和发酵液活性测定得到6株对Phytophthora nicotianae ACCC38065具有较好拮抗作用的菌株。其中,菌株28TJ19对Phytophthora nicotianae ACCC38065的拮抗效果最好,平板对峙和发酵液抑制率分别为52.8%、71.6%,其次为菌株28HB14(41.7%,76.2%)、29HB16(41.7%,67.3%)。利用形态学观察、ITS序列分析以及TEF序列分析对这6株菌株进行分类鉴定,4株菌株鉴定为哈茨木霉(Trichoderma harzianum),另外2株为长枝木霉(Trichoderma longibrachiatum)。经盆栽试验发现,这6株菌对烟草黑胫病均具有不同程度的防治效果,菌株29TJ04、29HB16的防效最好,达100%。

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我国地域广大,气候多样,盐碱土的分布非常广泛。最新公布的数字显示,目前,分布在我国西北、东北及滨海地区的盐碱荒地和盐碱障碍耕地总面积超过3333万hm2[1]。此外,荒地开垦不合理,农业灌溉措施不当,以及农药、化肥的不合理使用,作物的长期连作等都会引起土壤的次生盐渍化,而且还会加剧土传病害的发生,土壤盐渍化已上升为全球性问题。烟草是我国重要的经济作物,其长年连作使烟草土传病虫害危害程度增加,烟田有害物质逐年积累,烟草黑胫病(Phytophthoraparasiticavar.nicotianae)就是其中最具毁灭性的病害之一。田间一般发病率为15%~30%,严重田块可达80%以上,我国每年因烟草黑胫病造成的经济损失平均达1亿元以上[2]。木霉菌是一类具有开发应用前景的菌株,李梅云等[3]、王革等[4]、陈志敏等[5]筛选获得的木霉菌均对烟草黑胫病具有良好的防效,另外,木霉菌还可以在盐胁迫条件下诱导植物产生抗性,降低盐害对植物的影响,促进植物在盐胁迫下生长[6,7],有效缓解土壤次生盐渍化的影响。而Mohamed等[8]的研究发现,耐盐突变株能更好的抑制尖孢镰刀菌,减少枯萎病的发生,提高西红柿产量和矿物质含量。因此,筛选可适应盐碱化环境的生防菌株显得尤为重要。本研究以天津、河北采集的盐碱土为材料,筛选可耐盐碱且对烟草黑胫病具有较好防治效果的木霉菌株,并对其进行鉴定,为烟草黑胫病的更好防治提供理论依据。1材料与方法1.1材料来源1.1.1土壤样品来源2012年11月采自天津市和河北省地区的盐碱地,共20个点,多为轻度盐碱,土壤含盐量平均为0.2%,pH7.1~8.5。1.1.2供试菌株来源烟草疫霉菌PhytophthoranicotianaeACCC38065由中国农业微生物菌种保藏管理中心提供。1.2培养基PDA选择性培养基:马铃薯200g,葡萄糖20g,琼脂20g,蒸馏水1000mL,以上培养基中按2%、5%、8%加入氯化钠(质量分数),调节pH至8~9。PDA培养基:马铃薯200g,葡萄糖20g,琼脂20g,蒸馏水1000mL。PD培养基:马铃薯200g,葡萄糖20g,蒸馏水1000mL。SNA培养基:蔗糖0.2g,葡萄糖0.2g,磷酸二氢钾1.0g,硝酸钾1.0g,氯化钾0.5g,七水硫酸镁0.5g,琼脂20g,蒸馏水1000mL。1.3耐盐碱抗烟草黑胫病木霉菌株的分离筛选1.3.1耐盐碱木霉菌株的筛选称取10g土样加入装有90mL无菌水的250mL锥形瓶中,此为10-1稀释液,180r/min摇床振荡2h。从250mL锥形瓶中移取5mL悬液于装有45mL无菌水的锥形瓶中,摇匀,作为10-2稀释液。以此类推,配制10-3、10-4稀释液。吸取0.1mL稀释液接到选择性培养基上,用无菌玻璃刮刀同时涂布,将接种物均匀地涂开。同一个土壤样品连续吸取3个梯度稀释液,每梯度三个重复。28恒温培养箱培养。挑取不同形态的木霉菌菌落进行纯化,转接至含2%NaCl的PDA斜面保存。将筛选得到的菌株转接到含不同NaCl浓度(pH8.0)的PDA、PD培养基(CK)中,十字交叉法测量菌落直径,观察记录其产孢情况;过滤收集PD培养基中菌丝体,70过夜烘干,称取菌丝干重。1.3.2平板对峙培养参照陈志敏等[9]的方法进行。1.3.3木霉菌发酵液抑菌活性测定参照文献[9,10]的方法进行。1.4菌株鉴定1.4.1菌落形态观察将筛选得到的拮抗效果较好的木霉菌株接种于PDA、SNA培养基上,23标准培养架上培养7d,观察描述菌落形态及其产孢结构和孢子形态[11,12]。1.

参考文献

引证文献

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