肾透明细胞癌患者肿瘤组织中CD146mRNA的表达及意义

作者:陈慧春;徐元宏 刊名:安徽医科大学学报 上传者:康俊亮

【摘要】目的探讨肾透明细胞癌(CCRCC)患者肿瘤组织中CD146 mRNA的表达及意义。方法用ELISA法定量检测CD146蛋白含量及Real-Time PCR技术检测102例CCRCC患者肿瘤组织中CD146 mRNA的表达,并以51例肾脏良性病变患者手术正常肾组织作为对照。结果发现存在转移的CCRCC患者,CD146蛋白浓度与对照组比较差异有统计学意义(F=52.1,P<0.01),CD146 mRNA的平均表达值(0.043 8±0.002 4)明显高于原位CCRCC患者(0.038 2±0.001 1,P=0.018)和对照组患者(0.034 4±0.001 0,P=0.001)。结论 CD146 mRNA表达上调与CCRCC的病理分级及淋巴结转移相关,有望成为评判CCRCC恶性程度、转移潜能及预后的一个新指标,为临床的干预性治疗提供可靠依据。

全文阅读

CD146(也称为MUC18、MCAM、Mel-CAM、S-Endo-1、P1H12antigen)是一种跨膜糖蛋白,其最先在恶性黑色素瘤中被描述;并且表达于人类所有类型的血管内皮细胞的交界处。CD146参与控制细胞间的黏附,同时也参与血管的新生[1-2]。在人类黑色素瘤、前列腺癌、卵巢癌和乳腺癌中,已被认为是预测肿瘤进展和转移形成的分子标志物[3-4]。该研究目的是了解CD146mRNA在肾透明细胞癌(renalclearcellcarcinoma,CCRCC)中的表达及其与临床病理参数之间的关系,探讨肿瘤组织中CD146mR-NA的表达与CCRCC的浸润及转移的关系。1材料与方法1.1病例资料2008年1月~2012年1月在安徽医科大学第一附属医院外科手术的肾细胞癌患者102例,其中男68例,女34例;年龄31~82(61.2312.45)岁;51例对照组患者来自外科手术的肾脏良性病变患者正常肾组织,其中男35例,女16例;年龄26~79(56.1212.29)岁。CCRCC组和对照组之间年龄差异无统计学意义(P>0.05)。CCRCC和对照者都具有明确的病理诊断,其诊断、早期转移均符合《肾细胞癌诊断治疗指南》[5]。肿瘤的分级根据Fuhrman标准和TMN体系。1.2检测方法于清晨取所有对象空腹静脉血,快速置于2%EDTA抗凝试管内并离心5min(4000r/min),离心半径12.60cm,取上清液于-20保存待测CD146蛋白含量;从患者的肿瘤组织和对照组织中提取总RNA用于CD146mRNA基因的扩增和检测。1.3仪器和试剂1.3.1仪器检测CD146蛋白含量,仪器用美国BIO-RAD680酶联免疫检测仪,严格按说明书操作;基因的扩增和检测使用瑞士Roche公司提供的Lightcycler480II检测系统。1.3.2试剂CD146蛋白含量检测采用ELISA试剂盒(法国BioCytex公司);CD146mRNA基因的扩增和检测使用RNeasyMini试剂盒(德国QiagenSA)按照操作说明书,从患者的肿瘤和对照组织中提取总RNA。紫外分光光度计在260nm下对提取的RNA做质量检测,RNA标本保存在-80。1.0g总RNA和试剂盒SuperscriptTMFirst-StrandSyn-thesisSystemforRT-PCR(美国Invitrogen公司)用于合成cDNA。1.3.3CD146基因的表达CD146基因上游引物为5'-CCTGGAACGTCAACGGCAC-3',下游引物为5'-GGGTGGGTTAAATTGACCAGCTCC-3',扩增产物为177bp。-actin基因上游引物为5'-AC-CGAGCGCGGCTACAGC-3',下游引物为5-'CTCATT-GCCAATGGTGAT-3',扩增产物为180bp。PCR总反应体积为20l,100ng的引物和12.5l的SYBRGreenPCR扩增预混试剂(德国QiagenSA)。PCR反应条件如下:9515min;然后9415s,5835s,7235s,循环40次;最后为9515s,601min,9515s。1.4统计学处理采用SPSS14.0软件进行统计分析,数据以x珋s表示,采用t检验、单因素方差分析进行比较。2结果2.1CD146蛋白表达与临床因素的关系CCRCC患者CD146水平在对照组和CCRCC组中的变化与肿瘤组织是否转移有相关性。未转移组CD146浓度与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),转移组CD146浓度与对照组比较差异有统计学意义(P<

参考文献

引证文献

问答

我要提问