二陈汤对高脂饮食大鼠脂质代谢和Caveolin-1表达的影响

作者:丁珊珊;张凌媛;康洁;沈建英;吴同玉;高碧珍;廖凌虹 刊名:时珍国医国药 上传者:朱仁英

【摘要】目的观察化痰方(二陈汤)对高脂饮食大鼠血清和肝脏脂质含量和Cav-1表达的影响。方法 30只健康成年雄性大鼠分为正常组、高脂组和化痰组,高脂组和化痰组给予高脂饲料喂养14周,化痰组第11周起给予二陈汤灌胃4周。14周后处死大鼠,收集标本,检测各组大鼠血清和肝脏脂质(TC、TG)含量及内脏脂肪和肝脏Cav-1 mRNA表达。结果与正常组比较,高脂组大鼠血清和肝脏中TC和TG均升高,内脏脂肪和肝脏中Cav-1 mRNA表达均减少。与高脂组比较,二陈汤的干预使得化痰组大鼠血清和肝脏中TG降低,而TC的差异无统计学意义;内脏脂肪和肝脏中Cav-1 mRNA表达均增加。结论二陈汤对高脂饮食大鼠的化痰作用主要表现在TG的减少,可能与调控Cav-1的表达有关。

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高脂饮食导致脂质代谢紊乱,是脂肪肝、高脂血症等疾病的主要发病基础。中医学认为脂质代谢紊乱,多为过食肥甘、脾失健运、痰湿内生而成。小窝蛋白(Caveolin-1,Cav-1)是细胞质膜上的囊状结构-小窝的组成蛋白,对脂质代谢具有调节作用,协助肝细胞摄取游离脂肪酸合成甘油三酯(TG),并参与细胞胆固醇的调节。二陈汤为中医化痰的经典方之一,研究表明二陈汤对高脂饮食大鼠具有明显的降脂作用。本研究在此基础上,观察二陈汤对高脂饮食大鼠Cav-1表达的影响,探讨二陈汤降脂的分子机制,丰富“痰”的生物学内涵。1材料与方法1.1动物的分组和饲养30只3月龄健康雄性Wistar大鼠,体质量(20010)g,随机分为:1正常组(10只),采用普通饲料喂养,脂肪占总热量的10%;2高脂组(10只)和3化痰组(10只),采用高脂饲料喂养方法,脂肪占总热量的60%(猪油20%,白糖4%,脱脂奶粉2%,胆固醇1%,基础料73%)。10周后用经典化痰方-二陈汤对化痰组大鼠进行干预。二陈汤剂(半夏15g,橘红15g,茯苓9g,甘草4.5g)每日灌胃1次(每毫升药液含原生药0.435g,剂量1ml/100g体质量),干预4周,在此期间,正常组大鼠仍然采用普通饲料喂养,高脂组和化痰组仍然采用高脂饲料喂养。所有大鼠自由进食进水,光照时间为每日8:00至20:00。每周记录大鼠的体质量、体长、腹围。1.2标本的采集和处理待处理大鼠禁食12h后,用20%乌拉坦(5mg/kg)腹腔注射麻醉,腹主动脉采血,用于检测血脂;分别取内脏脂肪和肝脏迅速置液氮冷冻,然后转入-80冰箱保存,用于检测Cav-1的表达和肝脏中脂质的含量。1.3检测血清和肝脏中总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)的含量1.3.1血清TC和TG检测分离血清,采用日立7180自动生化分析仪进行检测。1.3.2肝脏TC和TG检测称取适量肝脏组织,按重量(g):体积(ml)=19的比例,加入9倍体积的匀浆介质,冰浴条件下匀浆,离心后取上清液,采用酶标仪比色法进行检测。1.4检测内脏脂肪和肝脏中Cav-1mRNA表达(Real-timePCR)用TRIZOL法抽提组织总RNA,Nanodrop2000微量紫外分光光度计检测其纯度和浓度后,将其逆转录为cDNA,随后进行实时荧光定量PCR。引物序列:Cav-1上游引物5'-GCC-TA-ACTCAAGCACCATTTTG-3',下游引物5'-TCCAGCAAGAACAT-TACCTCAA-3';内参基因采用GAPDH,上游引物5'-ACAGCAA-CAGGGTGGTGGAC-3',下游引物5'-TTTGAG-GGTG-CAGCGAACTT-3'。反应条件:95,30s;40个循环(95,5s;60,30s);MeltCurve。各样品的目的基因和内参基因分别进行Real-timePCR,mRNA相对表达量以2-Ct表示。1.5统计学方法所有数据以x珋s表示,利用SPSS19.0软件对数据进行处理组间差异采用方差分析,若方差齐,两两比较用LSD-t检验;若方差不齐,两两比较用Tamhane'sT2检验。2结果2.1第14周各组大鼠体质量、体长和腹围的比较前10周喂养时,正常组大鼠与高脂组和化痰组大鼠之间的体质量、体长和腹围差异随喂养时间而逐渐增大。开始进行干预时,高脂组和化痰组大鼠的体质量、体长和腹围较正常组大鼠显著增加;干预4周后,高脂组大鼠的体质量、体长和腹围较正常组仍然显著增加(P<0.01),而化痰组大鼠的体质量、体长和腹围却有所减少,但差异无统计学意义。见表1。表1第14周各组大鼠体

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