成年SD大鼠糖尿病心肌病模型的建立

作者:张良胜;李平;许翔;王莉;范忠才 刊名:中国当代医药 上传者:杨星宇

【摘要】目的探索成年SD大鼠糖尿病心肌病(DCM)模型建立的方法。方法 20只健康SD成年大鼠作随机分为DCM组(n=10)、对照组(n=10)。对照组喂养普通饲料,DCM组高脂饲料喂养12周。DCM模型的建立:对照组以枸橼酸缓冲液腹腔注射,DCM组使用等量1%链脲菌素腹腔注射。通过病理组织学证实为DCM心肌病理学改变。结果与对照组比较,DCM组的血清FBG、TC、LDL-C、TG均明显增高(P<0.05),而对照组的血清HDL-C较DCM组高(P<0.05)。与对照组比较,DCM组的大鼠心肌细胞排列紊乱,间质基质集聚与纤维化增多。第6周末,两组的空腹血糖差异无统计学意义(P>0.05),DCM组的IRI、胰岛素均高于对照组(P<0.05)。结论高脂、高糖膳食并小剂量STZ腹腔注射建立DCM模型,其方法成功率高,简单易行。

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近年来,中国糖尿病的发病率迅速上升,糖尿病前期患者高达1.48亿,糖尿病患者达9240万,防控形势严峻[1]。目前认为,糖尿病心肌病(diabeticcar-diomyopathy,DCM)较易导致严重心律失常和心力衰竭,是一种特异性心肌病。Hamby等在1974年首次提出DCM的概念,指由糖尿病引起肌代谢紊乱,心肌纤维化和心脏微血管病变等所致的心肌广泛结构异常,引起左心室肥大、舒张期和(或)收缩期功能障碍的一种疾病[2],本实验通过探索DCM模型建立的方法,为研究其发病机制及防治措施提供可靠的实验理论依据。1材料与方法1.1药品与试剂胰岛素检测试剂盒及链脲菌素(streptozotocin,STZ)购于美国Sigma公司;枸橼酸,枸橼酸三钠购于北京化学试剂出品厂;葡萄糖试剂盒由上海荣盛生物科技公司提供;血脂检测盒由南京建成生物研究所提供。1.2主要仪器超低温冰箱(MDF-382E,SANYO,Japan);Millipore超纯水仪(Elix3/Mini-QBicel,Millipore,USA);微量CHINAMODERNMEDICINEVol.21No.23August2014移液器(1000l/100l/10l,Eppendorf公司);低速离心机(Centrifuge5702,Eppendorf,Germany);全自动生化分析仪(Hitach-7060,日立公司,Japan);体视显微镜(S8APO,LEICA,Germany);光学摄像系统(AX-70型,Olympus,Japan);超声震荡器(JG-4301,天津精工医疗设备公司,China)。1.3造模方法按照董世芬等[3-4]报道的方法建立DCM模型。将20只健康SD大鼠随机分成DCM组(n=10),对照组(n=10),DCM组以高脂饮食喂养(59.5%基础饲料,0.5%胆固醇,10%蛋黄粉,10%猪油和20%蔗糖),对照组始终以普通饲料喂养。喂养至第6周,DCM组以1%STZ30mg/kg腹腔注射,对照组以同体积枸橼酸缓冲液腹腔注射。72h后取尾静脉血测量空腹血糖,血糖11.1mmol/L判定为2型糖尿病。造模结束后,对照组普通饲料喂养6周,DCM组高脂、高糖喂养6周。1.4SD大鼠左心室心肌病理切片制作1.4.1心室心肌HE染色SD大鼠断颈处死,快速取出心脏,以10%甲醛固定24h,用硬蜡包埋。切片厚度4m,连续切片。苏木素染色6~16min,经水冲洗,酒精盐酸分化。分化水洗以后,用温水蓝化后,流水冲洗6min以上,伊红复染(5~20s)。低浓度乙醇到高浓度乙醇切片脱水,80%乙醇1次(3~5min/次),95%乙醇2次(3~5min/次),100%乙醇2次(10min/次),二甲苯2次,树胶封片。1.4.2左心室心肌病变的观察在BX60型光学显微镜下,放大100、200、400倍分别观察HE染色左心室心肌病变。1.5血脂、血糖水平测定全自动生化分析仪Hitach-7060测定血脂水平,包括LDL-C、HDL-C、TC、TG。TC、TG和BG采用常规酶法,HDL-C和LDL-C采用直接法。1.6大鼠胰岛素、胰岛素抵抗指数的测定用Sigma公司的胰岛素试剂盒测定胰岛素,胰岛素抵抗指数(insulinresistanceindex,IRI)等相关指标。1.7统计学处理利用SPSS19.0统计软件处理数据,计量资料以xs表示,采用t检验,以P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1DCM模型的建立DCM组高脂饲料喂养6周后,两组的空腹血糖差异无统计学意义(P>0.05),但D

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