胆固醇酯转运蛋白基因I405V多态性与辛伐他汀的调脂效应

作者:刘晋秦;祖凌云;赵春玉;薛琳;张岩;李建平;高炜 刊名:中国临床康复 上传者:张双义

【摘要】目的:探讨胆固醇酯转运蛋白基因I405V多态性对血脂水平及辛伐他汀降脂疗效的影响。方法:选择北京大学第一医院心内科住院的血脂异常患者369例。均签署知情同意书的患者。运用聚合酶链式反应-限制性片断长度多态性方法测定胆固醇酯转运蛋白基因I405V多态性位点的基因型。对其中211例伴高胆固醇血症的冠心病患者给予辛伐他汀20mg/d治疗,4周后测定血脂变化值,分析胆固醇酯转运蛋白基因I405V多态性与基线血脂及服用辛伐他汀后血脂变化值的相关性。结果:血脂异常患者369例均进入结果分析。①中国北方血脂异常患者中的胆固醇酯转运蛋白基因I405V多态性位点的基因型频率分别为II基因型22.5%,IV基因型50.0%,VV基因型22.5%。②不同基因型的患者服用辛伐他汀4周后,II基因型患者三酰甘油下降最多,IV基因型次之,VV基因型下降最少。IV基因型比II基因型的总胆固醇降低值减少了0.27mmol/L(P=0.01),VV基因型比II基因型的三酰甘油降低值减少了0.40mmol/L(P<0.01)。IV+VV基因型比II基因型的总胆固醇降低值减少了0.31mmol/L(P<0.01)。③调整了年龄,性别,体质量指数混杂因素的影响作用后,II基因型患者服药4周后低密度脂蛋白胆固醇下降较多,IV+VV基因型下降较少。IV+VV基因型比II基因型的低密度脂蛋白胆固醇降低值减少了0.27mmol/L(P=0.03)。而三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇的变化值在不同基因型患者中差异不明显。④基因型频率是否符合Hardy-Weinberg平衡定律的检验采用卡方检验;不同基因型间基线血脂和服药后血脂变化值的比较采用方差分析;比较不同基因型和基线血脂以及服药后血脂变化的标准回归系数(β)大小用多元线性回归分析。结论:胆固醇酯转运蛋白基因的II基因型携带者对他汀类药物调脂疗效的反应最强。胆固醇酯转运蛋白基因I405V多态性可能是预测北京地区高胆固醇血症患者中他汀类药物调脂效应个体化差异的标记物之一。

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0引言辛伐他汀是安全的羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂,可有效调脂犤1犦,但是也存在个体化差异。目前认为药物效应的个体化差异是遗传与环境因素共同作用的结果。本课题旨在探讨胆固醇酯转运蛋白基因I405V多态性对基线血脂水平的影响及对辛伐他汀降脂疗效的影响。1对象和方法设计:多变量分析,基因型频率是否符合Hardy-Weinberg平衡定律的检验采用卡方检验;不同基因型间基线血脂和服药后血脂变化值的比较采用方差分析;比较不同基因型和基线血脂以及服药后血脂变化的标准回归系数()大小用多元线性回归分析。单位:北京大学第一医院心内科和北京大学第三医院心内科。对象:选择北京大学第一和第三医院心内科住院的血脂异常患者369例。纳入标准:总胆固醇>5.2mmol/L或低密度脂蛋白胆固醇>3.38mmol/L。纳入观察前4周内未服用任何调脂药物。签署知情同意书的患者。排除标准:继发性高胆固醇血症,糖尿病,肝肾功能不全。近期有心脏衰竭史,手术史者。既往对他汀类药物过敏者。孕妇及哺乳期妇女。设计、实施、评估者:设计、干预实施、评估者为全部作者,均受过专业培训,未采用盲法评估。方法:指标测定:入选患者取清晨空腹静脉血5mL测定血常规、肝肾功能、血糖、血脂、电解质。其中211例经冠状动脉造影诊断为冠心病的受试者接受辛伐他汀(杭州默沙东制药有限公司)20mg/d,治疗4周,患者服药期间避免合并应用其他调脂药物或经细胞色素P4503A4代谢的药物。患者于服药第29天(停药第1天)经隔夜禁食后取静脉血2mL检测血脂水平。采用高盐沉淀法提取基因组DNA。胆固醇酯转运蛋白基因I405V多态性的基因型分析的引物序列:正向引物为5’-GCAGAACAGTACTGGCCAAGCAGCG-3’,反向引物为5’-GCGGTGATCATTGACTGCAGGAAGCTCTGTA-3’。10L反应体系终浓度:1PCRBuffer(含MgCl21.5mmol/L),dNTP200mol/L,primer0.2mol/L、Taq酶15103U/L,甘油2%。聚合酶链反应条件:94预变性3min1个循环;94变性1min,60退火1min,72延伸1min,共42个循环;72延伸7min1个循环。酶切反应:15L反应体系:聚合酶链反应产物10L,10NEB1酶切反应缓冲液1.5L,RsaI内切酶4U。酶切条件:反应体系置37温箱中孵育20h。电泳条件:酶切产物置于溴化乙锭染色的35g/L琼脂糖凝胶以200V电压恒压电泳60min。主要观察指标:胆固醇酯转运蛋白基因I405V多态性的基因型。I405V多态性与羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂辛伐他汀调脂作用的相关性。统计学分析:由本院统计室采用EPI6软件建立数据库,所有数据实行双重录入,用SAS7.0软件进行统计分析。基因型频率是否符合Hardy-Weinberg平衡定律的检验采用卡方检验;不同基因型间基线血脂和服药后血脂变化值的比较采用方差分析;比较不同基因型和基线血脂以及服药后血脂变化的标准回归系数()大小用多元线性回归分析。2结果2.1参与者数量分析纳入血脂异常患者369例,均进入结果分析,无脱落者。患者平均年龄(559)岁,男性占65.3%,体质量指数(25.45.1)kg/m2。2.2统计推断2.2.1基因型频率分布对369例入选患者的基因型频率分布进行卡方检验,均符合Hardy-Wenberg平衡定律。胆固醇酯转运蛋白基因I405V多态性即胆固醇酯转运蛋白基因14外显子A1213G多态性,PCR产物经过酶切后形成315bp和285bp+30bp片

参考文献

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