斑马鱼胚胎发育过程中FGF3基因的表达

作者:贾聪聪;张小晶;黄陈平;林林;赵淑江;靳大庆 刊名:中国细胞生物学学报 上传者:高洪喜

【摘要】为了解斑马鱼胚胎发育过程中FGF3基因的时空性表达情况,并探讨其对胚胎发育的调控作用,该研究分别提取2,4,8,12,24,36,48,72 hpf斑马鱼胚胎的总RNA,经逆转录成cDNA,实时荧光定量PCR检测FGF3基因mRNA表达量;扩增FGF3基因特异片段,构建pGEM-T/FGF3基因片段重组质粒,经克隆及测序验证后,合成地高辛标记的反义RNA探针,以整体原位杂交法检测斑马鱼胚胎FGF3基因的空间性表达。结果显示:FGF3基因在2 hpf胚胎就有表达,并持续至胚胎孵化,12 hpf胚胎FGF3表达量达到高峰(P<0.01);胚胎发育过程中FGF3表达部位以头、尾、咽弓为主。由此得出结论 ,FGF3主要在胚胎发育早期表达,其表达可能与胚胎脑、眼、耳、咽弓及尾部器官的发育调控有关。

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中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2012, 34(4): 355–360 http://www.cjcb.org 收稿日期: 2011-11-04  接受日期: 2012-01-18 国家自然科学基金(No.30972509)资助项目 *通讯作者。Tel: 0577-86689901, E-mail: wzhcp@263.net 斑马鱼胚胎发育过程中FGF3基因的表达 贾聪聪1 张小晶1 黄陈平1* 林 林1 赵淑江1 靳大庆2 (1温州医学院环境与公共卫生学院, 温州 325035; 2温州医学院水域科学与环境生态研究所, 温州 325035) 摘要 为了解斑马鱼胚胎发育过程中FGF3基因的时空性表达情况, 并探讨其对胚胎发育的调控作用, 该研究分别提取2, 4, 8, 12, 24, 36, 48, 72 hpf斑马鱼胚胎的总RNA, 经逆转录成cDNA, 实时荧光定量PCR检测FGF3基因mRNA表达量; 扩增FGF3基因特异片段, 构建pGEM-T/FGF3基因片段重组质粒, 经克隆及测序验证后, 合成地高辛标记的反义RNA探针, 以整体原位杂交法检测斑马鱼胚胎FGF3基因的空间性表达。结果显示: FGF3基因在2 hpf胚胎就有表达, 并持续至胚胎孵化, 12 hpf胚胎FGF3表达量达到高峰(P<0.01); 胚胎发育过程中FGF3表达部位以头、尾、咽弓为主。由此得出结论, FGF3主要在胚胎发育早期表达, 其表达可能与胚胎脑、眼、耳、咽弓及尾部器官的发育调控有关。 关键词 斑马鱼; 胚胎发育; 成纤维细胞生长因子3; 实时荧光定量PCR; 整体原位杂交 成纤维细胞生长因子(fi broblast growth factors, FGFs)是由多个生物学结构相似的多肽生长因子组成的家族, 广泛分布于多细胞生物体中, 主要通过受体酪氨酸激酶(RTKs)介导的信号通路参与调控细胞增殖、迁移、分化、凋亡等过程[1-2]。目前, 已鉴定出斑马鱼FGFs有27个成员(其中5个为旁系同源), 人和鼠FGFs各有22个, 脊椎动物FGFs之间有着高度的同源性, 按进化及功能可归类为7个亚族, FGF3/7/10/22属同一亚族[1,3]。在脊椎动物胚胎发育过程中, 有研究显示FGF3参与多个器官的发育调控[4-6], 但现有研究还仅局限于FGF3对胚胎某个发育阶段或器官的调控作用, 尚无关于其在胚胎发育全程中整胚时空性表达的研究报道。本文采用实时荧光定量PCR和整体原位杂交技术, 研究模式生物斑马鱼胚胎发育过程中FGF3基因mRNA时空性表达的情况, 旨在从整体的角度探讨其对胚胎发育的调控作用。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 实验动物  野生型AB品系斑马鱼引自美国俄勒冈州立大学, 按斑马鱼工具书[7]描述的方法进行养殖。取健康、性成熟的斑马鱼, 于饲养系统关灯前按雌雄1: 2的比例放入孵化器内, 次晨给光后完成交配和产卵, 收集、挑选正常发育的胚卵, 放入含胚胎培养液的培养皿中, 置于(28±1) ºC光照培养箱内孵养, 保持光周期为明14 h: 暗10 h。 1.1.2 主要试剂 TRIzol试剂、PCR产物试剂盒、 DNA纯化试剂盒、小量质粒抽提和胶回收试剂盒购于碧云天生物技术研究所; 荧光定量PCR试剂盒(DRR041A)及RT-PCR试剂购于宝生物工程有限公司; 限制性内切酶Not I购于NEB公司; pGEM-T载体、T4 DNA连接酶购于Promega公司; 地高辛探针标

参考文献

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