寻常性银屑病患者外周血Th1和Th17细胞亚群的研究

作者:钟道清;罗育武;罗权 刊名:广州医药 上传者:张灵菲

【摘要】目的检测寻常性银屑病患者外周血中Th极化细胞Th1和Th17细胞数量和比例的变化,探讨其在银屑病发病机制中的作用。方法选择30例寻常性银屑病患者,采用流式细胞术(FCM)检测寻常性银屑病患者外周血中CD4+T细胞上IFN-γ+IL-17-(Th1)、IL-17+IFN-γ-(Th17)的表达,并与健康对照组比较,分析寻常性银屑病严重指数PASI和Th极化细胞表达量、Th1/Th17比值之间的关系。结果寻常性银屑病患者PBMC中IFN-γ+Th1细胞的数量、IL-17+Th17细胞的数量均高于健康对照组(P<0.01);Th1/Th17比值低于健康对照组(P<0.01),Th17细胞的数量与PASI呈正相关(P<0.01,r=0.726),Th1/Th17细胞比值与PASI指数呈负相关(P<0.01,r=0.573)。结论寻常性银屑病患者外周血存在Th1/Th17细胞失衡现象,Th1/Th17比值变化可能参与银屑病患者的免疫学发病机制。

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银屑病是一种常见的慢性炎症性疾病,病因复杂,其发病机理尚不明确。其中CD4+T淋巴细胞免疫功能异常在其发病中尤为重要。过去认为银屑病是Th1细胞介导的免疫性疾病,近年来,越来越多的研究支持Th17是银屑病发病中的关键性效应细胞[1-2]。但Th17细胞在银屑病发病中的作用,是如何参与其发病机制仍未明确。本实验拟通过流式细胞染色对寻常性银屑病患者外周血中Th1、Th17细胞进行研究,探讨Th17细胞亚群在寻常性银屑病患者免疫机制中的作用。1资料与方法1.1研究对象:2010年4月2011年4月间在本所门诊治疗的寻常性银屑病患者共30例,均符合以下诊断标准[3]:具有典型的红斑、银白色鳞屑等皮疹;行组织病理切片检查确诊。30例中男18例,女12例,年龄2571岁,平均年龄38岁,病程6个月10余年。所选患者近2个月内未服用类固醇激素以及免疫抑制剂,2周内未做局部治疗和处理。排除其他系统性疾病及自身免疫性疾病,排除其他重大疾病或严重慢性疾病如肿瘤、脏器功能衰竭等,排除孕妇及哺乳期患者。另取30例健康者作为对照组,均为本所职工或健康献血者。两组在性别及年龄上差异无统计学意义(P>0.05)。1.2主要试剂与仪器:流式细胞仪FACSCalibur(美国BD公司)。小鼠抗人CD4单克隆抗体(mAb)IgG1、FITC-抗人IFN-mAbIgG1及同型对照IgG1为美国BD公司生产。FITC-抗人IL-17mAbIgG1及同型对照IgG1购自美国Ebio-science公司.1.3标本收集及处理:分别抽取寻常性银屑病患者和健康对照组外周静脉血5ml,采用肝素钠抗凝,按照Th细胞检测试剂盒的要求处理标本并按流式细胞仪FACSCalibur的操作要求上机检测并分离Th1、Th17细胞,采用流式细胞术(FCM)检测寻常性银屑病患者外周血中CD4+T细胞上IFN-+IL-17-(Th1)、IL-17+IFN--(Th17)的表达,用Cellsquest软件获取并分析数据。1.4Th细胞检测:FCM测定Th细胞亚群,取上述PBMC悬液(1.0109/L)置于48孔培养板内,每孔1ml,并加PMA(50g/L)、离子霉素(1mol/L)和蛋白转运抑制剂莫能菌素(2mol/L)以阻止细胞因子向细胞外分泌,在37孵箱中培养5h。收集细胞分为对照管和实验管,分别加入PercP小鼠抗人CD4mAbIgG110l,混匀,室温放置20min对细胞表面抗原进行染色。加入Cytofix/Cyto-perm液200l,4放置20min,通透和固定细胞并洗涤后,进行胞内细胞因子染色,实验管分别加入IFN-mAbIgG1/PE,FITC抗人IL-17mAbIgG1各10l,对照管加入同型对照抗体,4避光孵育30min后,用Perm/Wash液1ml洗涤2次,最后以300l洗涤液重悬细胞,24h内采用FCM检测分析。以CD4直方图区分Th细胞(CD4+),最终以散点图IFN-和IL-17染色阳性表示Th1细胞和Th17细胞,用Cellsquest软件获取并分析数据。1.5统计学分析:所得数据以均数标准差(x珋s)表示,采用t检验;Th17细胞阳性率及Th1/Th17比值与病情活动指标的相关性采用Spearman相关性分析,相关系数用r表示。应用SPSS13.0统计软件包对所有临床资料进行统计分析及处理,P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1寻常性银屑病患者外周血Th极化细胞Th1、Th17水平:银屑病患者外周血中CD4+IFN-+Th1细胞、CD4+IL-17+Th17细胞的数量均高于健康

参考文献

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