齿瓣石斛种子保存和萌发形态发育过程研究

作者:崔秋华;孙永玉;李昆;段明伦;周志美;黄传响 刊名:江西农业大学学报 上传者:江瀚

【摘要】石斛属植物种子小,无胚乳,自然条件下,需与真菌共生才能萌发,萌发率极低。以齿瓣石斛的种子为研究对象,研究不同贮存条件对种子萌发率和活力的影响,并对种子萌发中的形态发育过程进行观察,试验结果表明,齿瓣石斛种子细小,解剖镜下观察呈纺锤形,由1层透明的种皮和1个种胚组成;种子比较适宜贮存温度是0~5℃,贮存1个月时种子萌发率和染色率较高,随着时间的延长,种子萌发率和染色率逐渐降低;种子接种后,吸水膨胀逐渐转绿,形成椭球体,椭球体以2条途径发育成幼苗,一是原球茎途径,二是根状茎途径。

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齿瓣石解(Dendrobiumdevonsanum.Paxt)为兰科(Orehidaceae)石解属(Dendrobium)多年生草本植物,常附生于温暖湿润的树林中的树干或岩石上,多分布于云南、贵州、广东、广西等热带和亚热带地区,喜温暖湿润、通风良好的环境,是我国低纬度地区的林下药用植物资源,具较高的药用价江西农业大学学报第34卷值。有报道称药用成分与铁皮石解相接近,其多糖含量还稍高于铁皮石解[l]。石解属植物种子小,无胚乳,在野外需要与真菌共生才能萌发[2],发芽率极低,其分株繁殖效率也很低,目前兰花种子人工繁殖一般采用非共生的无菌萌发方式[3],可以在短时间内得到快速繁殖,齿瓣石解也不例外。无菌播种之前,需要对种子活力进行测定,以避免播种材料不当造成人力和财力的浪费。通过染色反应来确定种子的生理活性,在兰花保育和离体培养中是十分重要的环节[4],在实际应用中,一般采用TTc染色法降6]。近些年来,由于人类的滥采乱挖和石解赖以生存环境的恶化,加上自身繁殖速度极其缓慢,其野生资源己面临枯竭而成濒危物种。目前,齿瓣石解种子的贮存条件和萌发中的形态发育过程这方面研究还未有报道。本文通过研究齿瓣石解种子的贮存条件和萌发中的形态发育过程,可为开展胚萌发和杂交育种奠定了实践基础,并为齿瓣石解种子的无菌萌发提供选择依据。1材料和方法Ll材料试验材料为齿瓣石解野生植株的未开裂茹果,采自云南省龙陵县小黑山自然保护区(24“15‘一24oslN,98038‘一99010‘E,)的常绿阔叶林中,主要伴生植物有西南桦(丑erulaalnoide:)、滇青冈(Cyclobalan叩515glauca)等。LZ方法1.2.1种子采收及预处理于2010年n月末在云南省龙陵县小黑山自然保护区采收葫果,放到牛皮纸袋内,避免受挤压,带回实验室,用软毛刷轻轻扫去表面的灰尘,用洗衣粉清洗干净,流水冲洗30min,备用。1.2.2种子形态学观察取处理好部分的茹果,放于培养皿中,用解剖刀轻轻划开,露出种子,然后将种子置于尼康SMZ15OO体视解剖显微镜下,观察种子的形态,测量种子的纵径、横径和和胚长。1.2.3种子贮存方法将处理好的部分茹果放于牛皮纸袋内,置于3种温度条件下作贮存处理:a:一20;b:0一5;c:室温条件,重复3次,贮藏时间为1、3、5个月,因为贮存时间过长茹果易开裂种子分散出来不利于灭菌,污染率大,种子萌发率低,对于种子保存意义不大,贮藏期间1、3和5个月后随机取样作种子发芽测定和活力测定。(l)种子发芽测定采用无菌播种。将处理好的种子转移到超净工作台内,体积分数为75%的酒精灾菌305,无菌水冲洗4次,质量分数为0.1%的HgclZ灭菌巧min,无菌水冲洗6次,滤纸吸干多余的水分,在培养皿中切开茹果,露出种子,同一个茹果中,取出部分种子用于无菌播种,余下的种子用于TTC染色。培养基采用作者前期做过的种子无菌萌发培养基筛选实验所得出的适宜培养基:MS+209几蔗糖+7g/L琼脂,用于无菌播种的种子接种到该萌发培养基上,置于温度25,光强2000lx,光周期为12h的条件下培养,接种后统计每瓶的播种数量,80d后统计萌发率。(2)种子活力测定采用TTC染色法。用0.1%的TTC溶液测定种子活力,染色时间为0.5h,3次重复。着色后,在尼康光学显微镜下观察种子染色情况,随机选取3个视野,分别计算每个视野的种子总数,有活力种子数和败育种子数。凡是胚染成有光泽的鲜红色,为有生活力的种子;凡是完全不染色或染成无光泽的淡红色或灰白色,为败育或无活力种子数。1.2.4种子萌发中的形态

参考文献

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