KLF4在弥漫性大B细胞淋巴瘤组织中的表达及其作用机制研究

作者:林志美;李建;饶进;邹忠晴;余晓玲 刊名:中国免疫学杂志 上传者:孟全海

【摘要】目的:探讨KLF4在弥漫性大B细胞淋巴瘤组织中的表达及其对弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响及作用机制;方法:选择弥漫性大B细胞淋巴瘤石蜡组织标本60例和淋巴结反应增生患者的淋巴结石蜡组织标本60例;免疫组化法测定组织中KLF4表达;Westernblot和RT-PCR测定弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞系ly1细胞和人B淋巴母细胞系HMy2.CIR细胞中KLF4蛋白、mRNA水平;ly1细胞分为空白对照组(不转染病毒)、阴性对照组(转染阴性对照病毒)和过表达KLF4组(转染过表达KLF4病毒);Westernblot和RT-PCR测定ly1细胞中KLF4蛋白、mRNA水平;CCK-8测定转染后ly1细胞增殖情况;Transwell小室法测定转染后ly1细胞侵袭和迁移能力;Westernblot法测定转染后三组ly1细胞Akt、p-Akt、PI3K、p-PI3K蛋白水平;结果:弥漫性大B细胞淋巴瘤组织B细胞中KLF4阳性表达率(30.0%)低于对照组织B细胞(100.0%)(P<0.05);ly1细胞中KLF4蛋白和mRNA水平低于HMy2.CIR细胞(P<0.05);与空白对照组和阴性对照组比较;过表达KLF4组ly1细胞中KLF4蛋白和mRNA水平升高(P<0.05);A值降低(P<0.05);侵袭和迁移细胞数降低(P<0.05);p-Akt、p-PI3K蛋白水平降低(P<0.05);空白对照组和阴性对照组ly1细胞中各指标比较差异无统计学意义(P>0.05);结论:弥漫性大B细胞淋巴瘤组织中KLF4水平降低;过表达KLF4可能通过PI3K/Akt信号通路抑制弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞增殖和侵袭迁移;

全文阅读

非霍奇金淋巴瘤是发病率增长比较快的恶性肿瘤之一,其最常见的病理类型为弥漫性大B细胞淋巴瘤,弥漫性大B细胞淋巴瘤是一种侵袭性肿瘤,具有明显异质性,通过联合化疗可使一半以上的患者生存期延长,但部分患者仍因肿瘤进展而死亡,因此探讨弥漫性大B细胞淋巴瘤发病的分子机制对治疗具有重要的指导意义[1,2]。人锌指转录因子Krüppel 样因子4(Krüppel-like factor 4,KLF4)是人锌指转录因子KLF家族成员,在多种细胞的生理功能中发挥重要作用,研究表明KLF4在多种恶性肿瘤的发生发展中具有重要作用,与恶性肿瘤细胞的增殖、侵袭和迁移等关系密切[3],过表达KLF4可抑制白血病细胞的增殖和迁移[4,5]。淋巴瘤患者磷脂酰肌醇激酶(phosphatidylinositol kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)信号通路被异常激活,抑制该信号通路对淋巴瘤具有抑制作用[6]。但KLF4在弥漫性大B细胞淋巴瘤组织中的表达及其对弥漫性大B细胞淋巴瘤增殖和侵袭迁移的影响及机制尚不清楚,本文对KLF4在弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达及其对细胞增殖和侵袭迁移能力以及PI3K/Akt信号通路的影响进行研究,为临床提供依据。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 研究对象 选择我院2017年6月~2018年6月初诊弥漫性大B细胞淋巴瘤患者的弥漫性大B细胞淋巴瘤石蜡组织标本60例和同期淋巴结反应增生患者的淋巴结石蜡组织标本60例为对照。弥漫性大B细胞淋巴瘤患者年龄(48.31±5.36)岁,男性37例,女性23例;淋巴结反应增生患者年龄(47.84±4.97)岁,男性35例,女性25例。弥漫性大B细胞淋巴瘤患者均为初治患者,均经病理证实为弥漫性大B细胞淋巴瘤,两组患者均签署知情同意书。 1.1.2 细胞株 弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞系ly1细胞和人B淋巴母细胞系HMy2.CIR细胞购自中国科学院细胞库。 1.1.3 主要试剂 苏木素、二甲苯、中性树胶、DAB试剂盒、3%过氧化氢、抗原修复液(北京中杉金桥生物技术有限公司),兔抗人KLF4单克隆抗体、兔抗人Akt多克隆抗体、兔抗人磷酸化-Akt(phospho-rylation-Akt,p-Akt)多克隆抗体、兔抗人PI3K多克隆抗体、兔抗人磷酸化-PI3K多克隆抗体(phospho-rylation-PI3K,p-PI3K)(美国Abcam公司),BCA蛋白浓度测定试剂盒、CCK-8试剂、Transwell小室、Matrigel、逆转录-聚合酶链反应(reverse transcri-ption-polymerase chain reaction,RT-PCR)试剂盒(美国Hyclone公司),胎牛血清、RPMI1640培养基(美国Gibco公司)等。 1.2 方法 1.2.1 免疫荧光双标双染色测定弥漫性大B细胞淋巴瘤组织和对照组织中KLF4表达情况 将弥漫性大B细胞淋巴瘤石蜡组织和对照石蜡组织进行切片,烤片30 min,梯度酒精水化,蒸馏水洗涤,PBS浸泡,加入抗原修复液修复30 min,PBS冲洗,加入过氧化氢孵育30 min,PBS洗涤,加入山羊血清封闭30 min,加入两种一抗:KLF4抗体和CD20抗体(1∶50),过夜孵育,对照组加入PBS代替一抗,PBS洗涤,加入荧光二抗(红色荧光和绿色荧光)1∶500过夜孵育,PBS洗涤,取出玻片,加入缓冲甘油,覆盖玻片,荧光显微镜400倍视野下观察。KLF4阳性细胞细胞核显红色荧光,CD20阳性细胞细胞膜显绿色荧光,计算

参考文献

引证文献

问答

我要提问