铁皮石斛无菌萌发及小苗快繁培养条件研究

作者:曾万勇;李金华;王智;杨玉稳;胡倩 刊名:武汉工业学院学报 上传者:赵晗汀

【摘要】以铁皮石斛成熟未开裂果实中的种子为外植体,比较了不同培养基配方中种子的萌发情况以及小苗增殖情况,通过组织快繁的方式获得了铁皮石斛壮苗。研究表明,铁皮石斛种子无菌发芽的最适培养基为WPM培养基,增殖最适培养基为1/3MS+香蕉泥(200 g/L)+蔗糖(30 g/L),快速繁殖过程无需添加激素。组培快繁技术的成功为铁皮石斛种苗的工厂化生产奠定了技术基础。

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铁皮石斛(DendrobiumofficinaleKimuraetMi-go)为兰科石斛属多年生附生草本植物,具有益胃生津,滋阴清热的功能,主要用于阴伤津亏,口干烦渴,食少干呕,病后虚热,目暗不明[1]。近年来,研究发现铁皮石斛所含多糖具有较强的抗肿瘤、增强免疫功能活性、清胃热、助消化等功能,以铁皮石斛为原料开发保健品越来越被市场所看好[2,3]。铁皮石斛主要分布在主要分布在我国西南及江南各省,是一种名贵的中药材,自古以来就有“药中黄金”之美誉,民间称其为“救命仙草”[4]。铁皮石斛多分布于海拔近千米的山地半阴湿岩石上。由于市场需求量大,加上长期过度采挖,野生铁皮石斛资源日渐枯竭,早在1987年就被国家列为野生药材重点二级保护濒危植物[5]。近年来,规模化设施栽培铁皮石斛的企业和个人越来越多,对铁皮石斛的种苗需求量越来越大。但铁皮石斛种子小,无胚乳,在自然状态下需要共生菌才能成苗,所以自然繁殖率极低。利用组织培养技术对铁皮石斛进行快速繁殖,是目前解决生产种苗短缺的有效方法,且不影响药效[6]。本实验以铁皮石斛种子为外植体,进行无菌萌发,并提出了一套对其无菌萌发的小苗进行组培快繁的程序,为快速育苗提供了有价值的技术资料和科学依据。1材料与方法1.1材料以云南软脚铁皮石斛为材料,在石斛果实成熟但未开裂时采收,以锡箔纸包裹,置冰箱4保存备用。1.2方法1.2.1种子萌发诱导取未开裂成熟果实,于500mL水中加入45滴Tween-20搅拌10min,自来水冲洗15min,用70%的酒精浸泡45s,无菌水冲洗2-3次;再用0.1%的升汞溶液处理20min,无菌水冲洗8-10次。用无菌滤纸吸干果实表面的水分,在果实的蒂端切开一个小口,用镊子夹住果实的顶端细长处,轻轻抖动,将种子均匀播撒入种子萌发诱导基本培养基中。试验选择的四种萌发培养基分别是A1:MS+蔗糖(30g/L);A2:1/2MS+蔗糖(30g/L);A3:1/3MS+蔗糖(30g/L);A4:WPM+蔗糖(30g/L);pH值均为5.8。接种后7天开始,间隔一段时间观察种子萌发产生原球茎的情况并拍照记录。1.2.2铁皮石斛小苗的快速繁殖从种子萌发产生的原球茎中选出大小基本一致的原球茎,每瓶接种1820棵于增殖培养基,培养温度为25,光照强度为15002000lux,每天光照14h。继代培养基选用不同基本培养基添加不同水平激素及天然附加成份。设计了以下7种增殖培养基:B1:WPM+蔗糖(30g/L);B2:WPM+香蕉泥(100g/L)+蔗糖(30g/L);B3:1/2MS+香蕉泥(100g/L)+蔗糖(30g/L);B4:1/3MS+香蕉泥(100g/L)+蔗糖(30g/L);B5:WPM+香蕉泥(200g/L)+蔗糖(30g/L);B6:1/2MS+香蕉泥(200g/L)+蔗糖(30g/L);B7:1/3MS+香蕉泥(200g/L)+蔗糖(30g/L),培养基pH均调到5.8。接种一个月后观察小苗生长情况,并统计株高、丛生芽数、生根数、根长、叶片数等生长指标。2结果与分析2.1铁皮石斛种子萌发原球茎诱导接种铁皮石斛种子后7天开始观察记录种子发芽情况,不同萌发培养基中铁皮石斛种子萌发状况汇总如表1。由表中可以看出,在MS培养基和WPM培养基中,铁皮石斛种子都可以萌发,但对MS培养基来说,矿质元素含量越低,萌发效果越好。铁皮石斛种子在WPM培养基中发芽率最高,且幼苗生长发育状况最佳,其次较适宜的培养基为1/3MS和1/2MS,最不适宜的为MS培养基,从不同培养基中的盐离子浓度来看,铁皮石斛在低盐浓度

参考文献

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