Ki-67、VEGF、Cyclin D1的表达与肝细胞癌生物学行为的关系

作者:崔刚;姜浩;金星林 刊名:世界华人消化杂志 上传者:孔春华

【摘要】目的:探讨肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)、胆管癌、肝硬化及正常肝组织中增殖细胞核抗原(Ki-67)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及周期素D1(Cyclin D1)蛋白表达的意义及其与肝癌生物学行为关系.方法:对HCC组织52例、胆管癌组织10例、肝硬化组织10例及正常肝组织10例,采用免疫组织化学S-P法检测Ki-67、VEGF及Cyclin D1蛋白.结果:Ki-67、VEGF及Cyclin D1在HCC的强阳性表达率分别为48.1%、55.8%及55.8%,均显著高于胆管癌、肝硬化及正常肝组织(?2=15.672、15.524、14.812,P<0.001).Ki-67与肿瘤大小、血管侵犯、分化程度有关;VEGF、Cyclin D1表达与肿瘤包膜完整、血管侵犯及肿瘤分化程度明显有关;Ki-67与VEGF及Cyclin D1间无相关.VEGF与Cyclin D1间的蛋白表达呈正相关(r=0.374,P<0.01).结论:Ki-67、VEGF及Cyclin D1表达与肝细胞癌生物学行为密切相关,与肝癌的发生和发展密切相关.关键词:肝细胞癌;增殖细胞核抗原;血管内皮生长因子;周期素D1;免疫组织化学

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0引言肝癌的发生发展是多基因、多途径、多阶段共同作用的结果.细胞周期调控失常和肿瘤血管生成是其发生发展过程中的两个重要方面.Ki67是出现在细胞周期的S、G、M以及G1晚期的细胞核中,是肿瘤细胞增殖过程中最具代表性的指标之一,他被认为是细胞增殖活性的标志物[1].血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)是血管生成调节因子,其主要作用在于参与血管内皮细胞的增殖、血管的形成及肿瘤的浸润和转移.周期素D1(CyclinD1)是参与细胞周期调控的周期素家族成员,在G1/S期转换中发挥重要作用,促进肿瘤发生.肝癌的发生与G1/S期检测点缺陷有关[2].在肝癌组织中,同时测定3个因子的实验尚未见报道.本研究采用免疫组织化学法检测Ki-67、VEGF、CyclinD1在肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)中的表达,旨在探讨其与肝癌生物学行为的关系以及3者之间的相互关系,为肝癌的治疗和预后提供有价值的判断指标.1材料和方法1.1材料收集2005-01/2010-12延边大学附属医院手术切除的肝细胞肝癌标本52例,其中男39例,女13例,年龄39-77岁,平均51.5岁.另选取肝硬化、肝外胆管癌组织(为避免与肝内胆管细胞型肝癌混淆选用了肝外胆管癌组织)及正常肝组织各10例进行对照研究.所有组织标本均行石蜡切片,肿瘤组织的分级,分期经病理证实确定.1.2方法1.2.1免疫组织化学SP法:一抗为鼠抗人Ki-67抗原免疫组化单克隆抗体(北京中山生物技术有限公司)、鼠抗人VEGF免疫组化单克隆抗体、兔抗人CyclinD1免疫组织化学单克隆抗体(福州迈新生物技术有限公司),抗原修复,过夜,DAB染色,苏木素复染,具体操作按试剂盒说明书进行.1.2.2结果判断:细胞核和/或细胞质出现黄色、棕黄色或棕褐色颗粒者为阳性细胞.阳性反应强度的分级兼顾染色深浅和阳性细胞所占百分比,制定判断标准是每张切片随机选取5个高倍视野(400),每个视野数100个细胞,先按阳性细胞所占百分比评分[3]:5%为0;6%-25%为1;26%-50%为2;51%-75%为3;76%为4.再按染色强度评分:不着色为0;淡黄色为1;棕黄色为2;棕褐色为3.最后按2者乘积数将每个标本的表达强度分为4个等级:阴性(-)1级(0,1,2);弱阳性(+)2级(3,4);中度阳性(++)3级(6,8);强阳性(+++)4级(9,12).统计学处理全部数据采用SPSS17统计分析软件进行?2检验,相关性分析采用Spearmen法P<0.05为有显著性差异.2结果2.1Ki-67、血管内皮生长因子和周期素D1在检测组织中的强阳性表达率Ki67、VEGF和CyclinD1在肝细胞肝癌的强阳性表达率分别为48.1%、55.8%及55.8%,均显著高于正常肝、肝外胆管癌及肝硬化组织(P<0.001,表1).Ki-67的免疫组织化学染色Ki-67阳性染色定位于细胞核,呈棕黄色颗粒,而胆管癌着色显著轻于肝癌,而在肝硬化组织中偶见少量阳性细胞(图1).VEGF蛋白阳性主要表达为细胞浆和细胞核着色为棕黄色,在胆管癌及肝硬化组织中表达为弱阳性(图2).CyclinD1肝癌细胞阳性染色主要表现为细胞核而细胞质以及细胞浆主要染色于肝纤维化部分,而胆管癌及肝硬化着色轻(图3).2.2Ki-67、血管内皮生长因子和周期素D1在肝癌组织中阳性率与临床参数的关系临床上<5cm的小肝癌病理研究提示其分化较好、二倍体细胞较多、大多为单个有包膜的肿瘤,且预后较好.随着发展成

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