肿瘤患者外周血中NKT和NK细胞检测的临床应用

作者:郭永炼;林惠玲;林志锋;张惠姗;童曼莉;刘桂丽;刘文辉;李淑莲 刊名:海峡预防医学杂志 上传者:张慧腾

【摘要】目的分析肿瘤患者外周血中自然杀伤T(NKT)细胞数量变化,并与自然杀伤(NK)细胞比较,探讨血中这两种细胞水平的临床应用价值。方法采用流式细胞术分析111例肿瘤患者血中这两种细胞含量,分为肠癌、膀胱癌和肝癌等9组,并与27例正常对照组比较,用SPSS 13.0软件统计分析。结果化疗后肿瘤患者的血中NKT细胞含量较对照组高;NK细胞含量化疗后较化疗前低,接近正常对照组水平。不同类型肿瘤患者这两种细胞存在差异。乳腺癌患者的NKT水平和肠癌患者NK细胞水平较高。结论肿瘤患者外周血中的NKT与NK细胞水平,在疗效监测上有重要临床价值。

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外周血中自然杀伤T细胞(naturalkillerTcells,NKT)是介于自然杀伤(NK)细胞和传统T细胞之间的一类T细胞亚群,它既可以表达T细胞的表面标志,又可表达NK细胞表面的一些特异分子[1]。现阶段国内外已有许多研究表明NKT细胞在调节机体获得性免疫、抗感染[2]、抗肿瘤发生和转移、移植和自身免疫[3]过程中均发挥重要的作用。NKT细胞在抗肿瘤发生和转移中具有T细胞和NK细胞不同的杀伤作用[4]。但许多研究都是体外实验。NKT细胞在体内含量较少,本文应用流式细胞术分析肿瘤患者外周血NKT细胞变化,旨在探讨NKT细胞在肿瘤疗效监测中的临床应用价值。1对象与方法1.1观察对象收集2006年11月至2007年11月间在厦门大学附属中山医院就诊的111例肿瘤患者,恶性肿瘤的诊断标准参见文献[5],其中肠道癌患者28例,膀胱癌7例、肝癌9例、肺癌25例、食管癌9例、胃癌9例、肾癌3例、乳腺癌15例、血液肿瘤6例,平均年龄62岁(3680岁);正常对照27例,均为健康体检者。肿瘤患者采用的化疗方案依据美国国家综合癌症网公开发布的临床实践指南(http://www.nccn.org)。1.2试剂与设备流式细胞仪型号:EPICSXL4、Q-Prep溶血仪为美国COULTER公司产品。CD3-FITC/CD16+56-PE、IgG1-FITC/IgG1-PE试剂均购于Immunotec(法国)公司(批号分别为:38和52)。1.3检测方法NKT和NK细胞检测,采集患者入院时及化疗前后1d空腹静脉血2mL,EDTA-K2抗凝,取100L抗凝血,分别加入CD3-FITC/CD16+56-PE、MouseIgG1-FITC/IgG1-PE20L,混匀后室温避光15min,溶血仪溶血后,采用488nm激光,用前向散射光和侧向散射光区分出淋巴细胞群,上机检测计数10000个淋巴细胞中CD3+/CD16+56+和CD3-/CD16+56+(NKT和NK)细胞的百分率,操作参考文献[6]。1.4数据处理数据以x珚s表示,用SPSS13.0软件包进行统计分析。2结果2.1对照组和肿瘤组数据正态性检验健康对照组和肿瘤患者组外周血中NKT与NK细胞数据经正态性检验,服从正态分布。2.2外周血NKT和NK细胞含量变化肿瘤患者入院时采集的外周血中NKT和NK细胞含量均高于正常对照组(P<0.05),见表1。表1肿瘤患者与正常人群NKT和NK细胞的水平Table1ThelevelsofNKTandNKcellsincancerpatientsandhealthyadults组别例数NKT数值NK数值肿瘤患者1117.393.04*26.1413.30*对照t值273.542.066.066**18.647.602.574*注:*P<0.05;**P<0.01。2.3化疗前后外周血NKT和NK细胞含量的变化患者化疗后外周血中NKT细胞含量仍显著高于正常对照组;NK细胞含量化疗后较化疗前显著降低,接近正常对照组水平,见表2。2.4不同病种的肿瘤患者治疗前外周血NKT和NK细胞含量的变化根据病种将恶性肿瘤患者分为9组,各组患者外周血NKT和NK细胞含量差异显著。肠癌患者外周血中NK细胞的含量最高,显著高于对照组;除了肾癌、乳腺癌和食管癌,其它上皮性肿瘤患者外周血NK细胞含量显著高于血液肿瘤患者。食管癌、胃癌、肾癌NKT细胞含量高于对照组,但差异无显著性意义;其余各组恶性肿瘤患者外周血中NKT细胞含量显著高于对照组;乳腺癌患者NKT细胞含量最高,且显著高于其它上皮性肿瘤组,见表3。表2

参考文献

引证文献

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