RACK1对肺腺癌A549细胞生物学行为及相关蛋白表达的影响

作者:杜凯丽;梁钢;康继辉;米小芳;王宏坤;肖虹;梁建芳;郑绘霞 刊名:中国卫生标准管理 上传者:何丽萍

【摘要】目的研究RACK1基因沉默对A549细胞生物学行为的影响,探究其对VEGF、Bcl-2表达的影响。方法转染RACK1 sh RNA至A549细胞,分别设稳定转染的实验组、阴性对照组和空白对照组。Western blot检测各组细胞RACK1、VEGF、Bcl-2的表达,平板克隆实验检测各组细胞的增殖情况,划痕愈合实验观察细胞运动迁移的改变,流式细胞术分析细胞凋亡率的变化。结果实验组细胞增殖能力下降,迁移能力减弱,凋亡率增高,VEGF、Bcl-2表达下调(P<0.05)。结论 RACK1基因沉默能抑制A549细胞的增殖和迁移,诱导其凋亡,下调VEGF、Bcl-2的表达。

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1 78 CHINA HEALTH S.IIANDARD MANAGEMENT,Vo1.7,No.5 片脱蜡至水。②用爱先蓝液 (pH 2.5)染 10~20 min,稍水洗。 ③ O.5%高碘酸水溶液氧化 5~10 min。④流水冲洗数分钟,再用 蒸馏水洗 。⑤入无色品红液于暗处并加盖作用 10~20 min。⑥用 0.5% 偏重亚硫 酸钠水溶液洗 3次 ,每次 1 min。⑦流水冲洗 5~ 10 min。⑧苏木素复染。⑨水洗后常规脱水 、透 明、封固 。 1.2.2高铁二胺 一爱先蓝 一高碘酸无色品红法 (1)试剂 :①高 铁二胺液 N.Ⅳ 一二 甲基 一间 一苯二胺二盐酸盐 120 mg,1V.IV 一 二 甲基 一对 .苯二胺二盐 酸盐 20mg,蒸馏水 50ml,60% 三氯化 铁水溶液 1.5 ml。将两种二胺盐同时溶于蒸馏 水,彻底溶解后, 加入 60%三氯化铁水溶液,用玻棒轻轻搅匀。此时溶液 pH值应 为 1.4~ 1.5。(2)操作 :①常规切片脱蜡至水。②蒸馏水洗 2~ 3次 。③室温下入高铁二胺液反应 18~24 h。④流水冲洗,蒸馏 水洗 2~3次。⑤以下步骤同 AB/PAS法。 1.2.3 Mayer黏 液 卡 红 法 (1)试 剂 :① Weigert铁 苏 木 素, ② Mayer卡红贮备液配方 :卡红 (或称胭脂红 )1 g,氢氧化铝 1 g, 无水氯化铝 0.5 g,50% 乙醇 100 ml。先将卡红、氢氧化铝溶解于 50% 乙醇混合后 ,再加入无水氯化铝于水浴中煮沸 3~5 min(煮沸时问 足将影响着色力 ) ;冷却至室温后过滤 ,补足 50% 乙醇水溶液 至总量 100 ml。用小口砂瓶盛装,4。C冰箱保存,使用时恢复至室温。 ③ Mayer卡红工作液配方 :Mayer卡红贮备液 1份 ,蒸馏水 4份 ,临 用前配制。(2)操作 :①常规切片脱蜡至蒸馏水。② Weigert铁苏木 素染 5~10min。③稍水洗,1%盐酸乙醇分化。④流水冲洗 10min后, 入 Mayer卡红工作液染 30min。⑤稍水洗。⑥常规脱水、透明、封固。 2结果 2 1爱先蓝 高碘酸 一无色品红法 (AB/PAS法 ) 酸性黏液物质呈蓝色,中性黏液物质呈红色 ,混合黏液物质 早紫红色 ,细胞核呈蓝色 2.2高铁二胺 .爱先蓝 .高碘酸无色品红法 硫酸化酸性黏液物质旱紫棕色至棕黑色 ,羧基化 酸性黏 液物 质呈蓝色 ,中性黏液物质呈红色 ,混合黏液物质呈紫红色 ,细胞 核呈蓝色 。.、 2.3 Mayer黏液卡红法 上皮性酸性黏液物质 、新型隐球菌荚膜呈红至深玫瑰红色 , 细胞核呈蓝色。 3讨论 而 胃的肠腺化生或肠型 胃癌的癌细胞则往往分泌酸性黏液。 黏液物质一般具有 以下特性 :对异染性染料具有异染性或称变色 反应 ,对碱性染料具有很强的亲和力 ,遇醋酸可发生沉淀 (胃黏 膜除外 );可溶于弱碱性溶液 1o黏液染色方法众多 ,爱先蓝 (AB) 和高碘酸的结合可能是最好的 “广谱黏液”染色,因为它可显示 中性 、弱酸性和强酸性黏液物质。专门显示强酸性黏液 的染色方 法有多种 ,包括胶体铁 、高铁二胺 以及经典的黏液卡红染色。当 癌的黏液分泌异常时 (常常因为碳水化合物合成不完全 ),可以通 过黏液染色加 以推测 。以上染色法的原理不尽相同 。铜酞花青 染料爱先蓝与酸l生黏液物质含有的羧基或硫酸根结合形成蓝色的 不溶性复合物 ;高铁二胺染色则 由二胺盐与硫酸化黏液物质结合 形成紫棕色至棕黑色的复合物 ,反应 中的催化剂三氯化铁可加

参考文献

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