豆根管食通口服液对食管癌造模大鼠细胞周期调控因子p16、Rb、cyclinD1、CDK4的影响

作者:王新杰 刊名:深圳中西医结合杂志 上传者:王立军

【摘要】目的观察豆根管食通口服液对食管癌造模大鼠细胞周期调控因子的影响,从细胞分子水平探讨该药的作用机制。方法选用健康Wistar大鼠,采用皮下注射甲基戊基亚硝胺(MANA)5mg/kg,随机分为正常组,模型对照组(模型组),豆根管食通高、中、低剂量组,西药替加氟组(化疗组),分别灌服生理盐水及受试药物,处死大鼠进行下列指标检测:①各组大鼠的体重及存活率变化;②各组大鼠肉眼及镜下病理组织学变化;③应用S-P免疫组化法检测大鼠食管组织p16、Rb、cyclinD1、CDK4、PCNA蛋白的表达。结果与化疗组比较,豆根管食通口服液能降低食管癌大鼠的死亡率并可恢复大鼠体重,以高剂量组最为明显(P<0.01)。②各药物治疗组p16、Rb表达率均有不同程度的升高,以豆根管食通高剂量组升高最不明显,与模型组比较有统计学意义(P<0.05)。③cyclinD1、CDK4在食管癌模型组表达率明显提高,与正常组比较有显著性差异(P<0.01)。结论豆根管食通口服液对食管癌具有较好的防治作用,其抗癌作用的分子机理可能是通过上调抑癌基因p16、Rb,下调癌基因cyclinD1、CDK4的表达,阻断细胞由G1期→S期过渡,从而抑制大鼠食管癌细胞生长。

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食管癌是食管鳞状上皮的恶性肿瘤,中国是世中间剂量组用药。高剂量组生药含量3g/mL(经界上食管癌的高发国家,也是目前世界上食管癌死折算为临床用药量的30倍),中间剂量组生药含亡率最高的国家之一,平均年死亡率为14.59/10量2g/mL(经折算为临床用药量的20倍)。万,居恶性肿瘤死亡的第4位,在我省更是位居恶1.2.3对照药品替加氟片:口服片剂,购于性肿瘤之首[1],可见食管癌严重危害着人民的生命健河南中医学院第一临床医院西药房,上海华联制药康。因此,加强对本病的研究,提高临床疗效、改有限公司生产,批号:0108043,实验时用蒸馏水将善患者的生存质量、延长生存期是肿瘤工作者面临替加氟片配成4mg/mL溶液。的首要任务。我国有丰富的中医药资源,有高深的1.2.4麻醉药品盐酸氯胺酮注射液:上海第中医药理论,如何在辨证论治的基础上运用丰富而又价格低廉的中药治疗食管癌,以维护人民生命健二制药厂生产,批号:011006。康,具有非常重要的现实意义。1.3实验主要试剂1材料与方法兔抗p16、Rb、cyclinD1、CDK4、PCNA抗1.1实验动物体,均购于武汉博士德生物工程有限公司,批号分健康Wistar大鼠120只,雌雄各半,体重(120别为Lot:BA0266、BA0289、BA0770、BA0310、10)g,由郑州大学医学院动物实验中心提供,合格BM0104;链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶免疫组化证书:医动字第410116号。染色超敏试剂盒(S-Pkit),福州迈新生物技术开发1.2药品公司产品。1.2.1造模药品甲基戊基亚硝胺(MANA)1.4实验主要仪器由华西医科大学提供;液体石蜡:山东淮河制药厂DT-300A型电子天平:上海医用激光仪器厂产生产,批号:0210834,实验时用液体石蜡配成0.2%品,双目光学显微镜和显微照相机:日本Olylmpus甲基戊基亚硝胺溶液,置于4冰箱内备用。产品;上海DQP-9010电脑切片机:上海医用仪器1.2.2治疗药品豆根管食通口服液:10mL/支,厂生产;超净工作台:北京西城区半导体设备一厂(含生药1g/mL)为复方中药制剂,主要成分为山生产。豆根、制南星、急性子、黄药子、姜半夏、沉香、1.5动物模型建立、分组及给药郁金和三七等,由河南中医学院第一临床医院制剂选用健康Wistar大鼠,常规饲料饲养,自由饮中心提供,批号:020425。实验时以此浓度供低剂水,每周1次皮下注射甲基戊基亚硝胺(MANA)量组使用(经折算为临床用药量的10倍),实验前溶液5mg/kg共20周,末次注射后1周随机抽取3另以该药为基础浓缩两组药液分别作为高剂量组、只大鼠处死,取食管纵切置于10%中性福尔马林缓冲液固定后,各常规制片3张,HE染色,病理学检表1各组大鼠治疗前后体重及存活率变化查均证实为食管癌,造模成功后随机进行分组。空体重死亡率存活率组别n治疗前治疗后(/%)(/%)白对照组(下称正常组):正常饲养的不造模Wistar正常组1551707153676015(100)大鼠15只,每只每天灌服蒸馏水5mL/kg(d.4w);模型组15475082454782(13.3)13(86.7)模型对照组(下称模型组):食管癌模型大鼠15化疗组1547407546771*5(33.3)10(66.7)只,每只每天灌服蒸馏水5mL/kg(d.4w);豆根管管食通高剂量组1546410347896*015(100)**管食通中剂量组1547108047178*015(100)**食通高、中、低剂量组:食管癌模型大鼠均为15只,管食通低剂量

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