g6pd基因在野生型斑马鱼胚胎发育过程中的表达

作者:夏海雄;李莉;周艳华;任平平;何志旭;舒莉萍; 刊名:浙江大学学报(医学版) 上传者:向治霖

【摘要】目的:观察g6pd基因在野生型斑马鱼胚胎早期发育过程中的表达情况。方法:利用基因数据库和BLAST软件分别进行g6pd基因的共线性分析和G6pd蛋白质序列相似性分析。原位杂交技术观察不同时相斑马鱼胚胎中g6pd基因的表达;构建g6pd-EGFP-pCS~(2+)重组质粒,并将其显微注射入斑马鱼胚胎内,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达;蛋白质印迹法检测24、48、72 hpf斑马鱼胚胎中G6pd蛋白的表达量;改良G6pd定量比值法检测24、48、72 hpf斑马鱼胚胎中G6pd酶活性。结果:g6pd基因在进化过程中相对保守,斑马鱼与人类的G6pd蛋白质相似度为88%,斑马鱼与小鼠的G6pd蛋白质相似度为87%。原位杂交试验结果显示,g6pd基因主要表达于斑马鱼的造血组织,显微注射g6pd-EGFP-p CS2+重组质粒后观察的结果与原位杂交试验结果一致。24、48、72 hpf斑马鱼胚胎中G6pd蛋白相对表达量分别为1.44±0.03、1.47±0.05、1.54±0.02,差异无统计学意义(P>0.05);G6pd酶活性分别为1.74±0.17、1.75±0.12、1.71±0.22,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:成功观察到斑马鱼体内g6pd基因表达部位及其变化规律,并测定了不同发育时相斑马鱼胚胎中G6pd蛋白表达和酶活性,为建立斑马鱼G6PD缺乏症模型奠定了基础。

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收稿日期:2017-10-20 接受日期:2017-12-03 基金项目:国家自然科学基金(31360285) 第一作者:夏海雄(1990—),男,硕士研究生,主要从事医学免疫学研究;E-mail:912500243@qq.com;https://orcid.org/ 0000-0002-6776-9725 通信作者:舒莉萍(1974—),女,博士,教授,主要从事医学免疫学研究;E-mail:gyslp456@gmc.edu.cn;https://orcid. org/0000-0003-2817-3061;何志旭(1967—),男,博士,教授,主要从事儿科学研究;E-mail:hzx@gmc.edu.cn;https:// orcid.org/0000-0002-8263-129X http:∥www.zjujournals.com/med DOI:10.3785/j.issn.1008-9292.2018.02.08 ·原 著· g6pd 基因在野生型斑马鱼胚胎发育过程中的表达夏海雄1,2,李 莉1,周艳华1,任平平1,3,何志旭1,3,舒莉萍1,2,4 1.贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心, 贵州 贵阳550004 2.贵州医科大学基础医学院免疫学教研室, 贵州 贵阳550004 3.贵州医科大学儿科学教研室, 贵州 贵阳550004 4.贵州医科大学实验动物中心, 贵州 贵阳550004 [摘 要] 目的:观察 g6pd 基因在野生型斑马鱼胚胎早期发育过程中的表达情 况。 方法:利用基因数据库和 BLAST 软件分别进行 g6pd 基因的共线性分析和 G6pd蛋白质序列相似性分析。 原位杂交技术观察不同时相斑马鱼胚胎中 g6pd 基 因的表达;构建 g6pd-EGFP-pCS2+ 重组质粒,并将其显微注射入斑马鱼胚胎内,荧 光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达;蛋白质印迹法检测24、48、72hpf斑马鱼胚胎 中G6pd蛋白的表达量;改良G6pd定量比值法检测24、48、72hpf斑马鱼胚胎中 G6pd酶活性。 结果:g6pd 基因在进化过程中相对保守,斑马鱼与人类的G6pd蛋 白质相似度为88%,斑马鱼与小鼠的G6pd蛋白质相似度为87%。 原位杂交试验 结果显示,g6pd 基因主要表达于斑马鱼的造血组织,显微注射 g6pd-EGFP-pCS2+重 组质粒后观察的结果与原位杂交试验结果一致。 24、48、72 hpf 斑马鱼胚胎中 G6pd蛋白相对表达量分别为1.44±0.03、1.47±0.05、1.54±0.02,差异无统计学 意义(P>0.05);G6pd酶活性分别为1.74±0.17、1.75±0.12、1.71±0.22,差异无 统计学意义(P>0.05)。 结论:成功观察到斑马鱼体内 g6pd 基因表达部位及其变 化规律,并测定了不同发育时相斑马鱼胚胎中G6pd蛋白表达和酶活性,为建立斑 马鱼G6PD缺乏症模型奠定了基础。 [关键词] 葡糖磷酸脱氢酶缺乏; 葡糖磷酸脱氢酶; 原位杂交; DNA,重组; 质 粒; 基因表达; 斑马鱼; 胚胎发育[中图分类号] R394 [文献标志码] A Expression of g6pd gene in wild type zebrafish embryos of early development XIA Haixiong1,2, LI Li1, ZHOU Yanhua1, REN Pingping1,3, HE Zhixu1,3, SHU 浙 江 大 学 学 报 ( 医 学 版 ) JO

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