利拉鲁肽早期干预对高脂饮食大鼠代谢的影响

作者:王良雪;李春盈;洪莹;郑超; 刊名:浙江医学 上传者:童辉杰

【摘要】目的观察利拉鲁肽早期干预对高脂喂养大鼠代谢的影响。方法雄性SD大鼠18只,随机均分为普通饲料(ND组),高脂饲料(HFD组),高脂+利拉鲁肽(Lira组),Lira组高脂喂养同时给予利拉鲁肽200μg/kg皮下注射18周。记录体重、进食量、葡萄糖耐量实验AUC、胰岛素钳夹实验葡萄糖输注率(GIR),酶联免疫吸附法测血清TG、TC、胰高血糖素样肽-1(GLP-1),染色观察肝脏病理、骨骼肌毛细血管密度。结果与ND组大鼠相比,HFD组大鼠体重、脂体比、AUC、TG、TC显著升高(均P<0.05),GIR、骨骼肌血管密度显著下降(均P<0.05),肝脂肪变明显;Lira组比HFD组摄食少且食物利用率低,血清GLP-1显著增加(均P<0.05);Lira组大鼠与ND组相比,体重、脂体比、血清TG、TC、AUC、GIR、骨骼肌血管密度均无统计学差异(均P>0.05)。结论利拉鲁肽干预减少高脂喂养大鼠摄食量,降低食物利用率,控制体重,改善血脂代谢及肝细胞脂肪变性,保留高脂喂养大鼠的毛细血管密度,维持胰岛素敏感性且无低血糖等不良反应。

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随着西方高热量生活方式的传播,近几十年来肥胖的患病率急剧增加,是一个非常普遍的全球公共健康问题。目前,改变生活方式和运动干预被视为肥胖的预防和治疗的基石,但许多患者很难改变生活方式;减肥手术虽然有效,但有手术相关风险和体重反弹的可能性,许多减肥药物因为严重的不良反应已经退出市场。胰高血糖素样肽-1(GLP-1)是一种肠道内分泌L细胞分泌的促胰岛素分泌的激素,葡萄糖依赖性促进胰腺β细胞分泌胰岛素,减慢胃排空和控制食物摄入量,除了对食欲的影响外,GLP-1还可能在能量代谢中起作用。然而,在生理条件下,内源性GLP-1的活性很快被二肽基肽酶IV(DPP-4)降解[1]。利拉鲁肽是一种GLP-1受体激谢科动剂,2014年9月,美国食品药物管理局(FDA)批准利拉鲁肽3mg用于治疗肥胖,在此之前,低剂量利拉鲁肽1.8mg已被广泛用于治疗2型糖尿病,且已经证明利拉鲁肽治疗非糖尿病肥胖患者具有减肥和改善心血管的作用[2]。笔者通过建立高脂喂养大鼠模型,旨在观察利拉鲁肽早期干预对高脂喂养大鼠代谢的影响。1材料和方法1.1材料60%脂肪的高脂饲料购自江苏美迪森股份有限公司;利拉鲁肽购自丹麦诺和诺德公司;大鼠血清TG、TC、GLP-1的ELISA试剂盒购自上海博蕴生物科技有限公司;麻醉药戊巴比妥钠购自美国Sigma公司;GLP-1受体一抗购自英国Biorbyt公司,CD34一抗购自英国Abcam公司。1.2动物SPF级6周龄雄性SD大鼠18只,体重(160±10)g,购自上海斯莱克实验动物有限责任公司,饲养在温州医科大学实验动物中心。实验动物合格证编号为XI504106,实验动物获得伦理委员会批准。适应性喂养1周后随机分为正常饮食(ND组)、高脂饮食(HFD组)、高脂饮食的同时利拉鲁肽干预(Lira组),每组6只,利拉鲁肽皮下注射200μg/kg,1次/d,高脂组皮下注射等量0.9%氯化钠注射液。每周记录进食量、体重、每2周测定血糖,16周行葡萄糖耐量实验。18周末行胰岛素钳夹实验,胰岛素钳夹实验结束后颈动脉取血、心脏灌流法处死、取组织。1.3方法1.3.1总摄食量1~13周每天记录每组每只大鼠进食量,直至实验结束计算得到每只大鼠总进食量;食物利用率(%)=每只大鼠总体重增长量/每只大鼠总摄食量×100%;脂体比(%)=睾丸与肾周内脏脂肪湿重/总体重×100%。1.3.2血清生物化学测定采用酶联免疫法测定血清TG、TC、GLP-1水平。1.3.3肝组织及骨骼肌组织染色观察每只大鼠取相同部位新鲜肝组织和骨骼肌组织,4%多聚甲醛固定,常规脱水,石蜡包埋,切片,HE染色后镜下观察肝脏脂肪变程度;石蜡切片经脱蜡、脱水、高压抗原修复、5%BSA室温封闭1h,肝组织GLP-1受体一抗4℃孵育过夜,骨骼肌组织CD34一抗4℃孵育过夜,PBS洗3次,5min/次,荧光二抗37℃1h,DAPI染核10min,封片镜下观察肝细胞GLP-1受体免疫荧光染色,确定是否有GLP-1受体表达;CD34特异表达于血管内皮细胞,染色结果骨骼肌横切面绿色荧光代表一个血管,观察骨骼肌组织毛细血管密度。1.3.4胰岛素敏感性实验葡萄糖耐量实验:大鼠饥饿12h,测0min空腹血糖,腹腔注射20%的葡萄糖,分别测定15、30、60和90min的血糖水平。胰岛素钳夹实验:18周开始大鼠饥饿15h,腹腔注射1.5%戊巴比妥钠40mg/kg,麻醉平稳20min后迅速完成气管插管,颈外动静脉置管,动脉通过装有肝素生理盐水30U/ml的微量注射泵连接血压仪,监测血流动力学;静脉通过3通管连接2个微量注射泵,分别注射3

参考文献

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