农大7号欧李叶片愈伤组织的诱导和增殖

作者:武莎莎;张彬;杜俊杰;王鹏飞;张建成;穆霄鹏;傅鸿博; 刊名:山西农业科学 上传者:林辉

【摘要】以欧李农大7号品种的大田苗叶片为外植体,研究了单因素2,4-D,NAA和多因素NAA,6-BA,TDZ生长调节剂对该品种愈伤组织诱导和增殖的影响。结果表明,单因素和多因素均可诱导出愈伤组织,单因素以2,4-D0.8 mg/L最好,诱导率达到97.5%;NAA 0.5 mg/L次之,诱导率为93.7%。多因素在MS培养基下,MS+NAA 0.8 mg/L+6-BA 1 mg/L组合最佳,诱导率达到98.8%;MS+NAA 0.5 mg/L+TDZ 3.5 mg/L次之,诱导率为98.3%。增殖时,生长调节剂单因素添加2,4-D 0.8 mg/L最好,多因素MS+2,4-D 0.6 mg/L+6-BA 0.2 mg/L组合最佳。

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欧李(Cerasus humilis Bge.)又名钙果,为蔷薇科樱桃属[1],是我国特有的一种优良灌木果树,分布于我国的黑龙江、辽宁、内蒙古、河北、山东、山西等省区,多生长在向阳山坡或沙丘边缘,资源相当丰富[2]。其耐寒、耐旱、耐瘠薄,固土保水作用强,山西省已将其列为经济林木树种[3]。欧李果实含有糖、蛋白质、维生素和各种矿质元素及抗氧化等人体营养和保健活性物质[4]。随着果树转基因研究的不断深入,其基因功能的验证要求能在大多数的木本果树本身或类似的果树上进行,但多数木本果树结果晚、体积大、验证时间长、成本高。欧李具有结果早、树体小的特点,作为木本果树的基因功能验证模式植物优势明显。农大7号品种是新选育的一个鲜食欧李品种,其外观漂亮、香味浓郁、酸甜适口,且结果早、丰产性强[5],但若要作为转基因功能验证的模式品种,必须首先建立其高效再生体系。尽管近年来欧李再生体系的研究已有报道[6-9],但再生体系因品种其差异较大。本研究以欧李农大7号为材料,探讨其愈伤组织建立的技术,旨在为欧李高效再生体系的建立提供理论基础。1材料和方法1.1试验材料供试材料取自山西农业大学欧李资源圃农大7号品种当年生枝条中上部平展无病害叶片。1.2试验方法1.2.1外植体处理将剪下的叶片放在流动水下冲洗30 min,用洗洁精清洗3~5 min,之后用清水冲洗至无泡沫为止。在无菌条件下,将材料用0.1%升汞消毒9 min,再用75%酒精消毒15 s,然后用灭好菌的无菌蒸馏水冲洗3~5次,最后用无菌滤纸擦干。将叶片去掉叶边缘及叶柄,剪成长宽为1 cm大小方块,近轴端接触培养基。1.2.2单因素NAA,2,4-D对愈伤组织的诱导试验生长素NAA设0.5,0.8,1.2 mg/L等3个质量浓度,2,4-D设0.5,0.8,1.0,1.2,1.5 mg/L等5个质量浓度,在MS培养基中进行培养。1.2.3多因素NAA,6-BA在不同培养基中对愈伤组织的诱导试验选MS,1/2 MS和改良MS这3种培养基作为基本培养基,其中,改良MS培养基为在MS培养基基础上钙盐、铁盐含量各增加了25%,生长素NAA质量浓度设为0.4,0.8,1.2 mg/L,6-BA设0.5,1.0,1.5 mg/L,按正交试验L9(33)进行处理设计。1.2.4多因素NAA,TDZ在MS培养基中对愈伤组织的诱导试验生长素NAA设0.2,0.5,0.8 mg/L等3个质量浓度,分裂素TDZ设1.5,3.5,5.5 mg/L等3个质量浓度进行完全交叉试验,在MS培养基中进行培养。1.2.5愈伤组织增殖试验将培养25~30 d、大小为0.3~0.5 cm3的愈伤组织分别转接到单因素培养基和多因素培养基上进行增殖试验。其中,单因素为MS+2,4-D,2,4-D质量浓度设为0.6,0.8,1.0,1.2 mg/L;多因素为MS+2,4-D+6-BA,其中,2,4-D质量浓度设为0.6,0.8,1.0,1.2 mg/L,6-BA质量浓度设为0.2,0.5 mg/L,进行交叉试验。培养30 d后观察愈伤增殖情况。培养基p H值为5.8~6.0、蔗糖30 g/L、琼脂6.5 g/L。外植体接种后先暗培养10 d,后再在光下培养,30 d后观察统计结果。培养条件(25±1)℃,光暗周期18 h/6 h,光照强度2 000~3 000 lx。愈伤组织诱导率=产生愈伤组织的块数/接种的总块数×100%(1)1.3数据分析采用SAS统计分析软件包对试验观测到的数据进行方差分析、多重比较。2结果与分析2.1单因素NAA,2,4-D对愈伤组织

参考文献

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