高效液相色谱-串联质谱法测定多种食品和饲料中的胶霉毒素

作者:曹晓琴;张涛;施璐;房辉;陈中强;方振峰; 刊名:食品与发酵工业 上传者:陈萱萱

【摘要】建立了加压溶剂萃取结合全自动固相萃取技术-高效液相色谱-串联质谱法(high performance liquid chromatography-mass spectrometry,HPLC-MS/MS)测定玉米和小麦等禾谷食品、猪的肌肉和肝脏等动物源食品及猪和鸡的饲料中胶霉毒素的液相色谱串联质谱法。前处理时依次采用加压溶剂萃取(pressurized liquid extraction,PLE)和全自动固相萃取(automated solid phase extraction,ASPE)技术,乙腈/水(50/50,V/V)为玉米、小麦及饲料样品的加压溶剂萃取液,乙腈/正己烷(60/40,V/V)为猪的肌肉和肝脏样品的加压溶剂萃取液,甲醇/水(85/15,V/V)为所有样品的全自动固相萃取洗脱液。HPLC-MS/MS检测,基质匹配工作曲线外标法定量。结果表明,不同样品中胶霉毒素在0.2~100μg/L范围内具有良好的线性关系,相关系数R2≥0.995 8;不同样品中的胶霉毒素最低检出限在0.09~0.15μg/kg,最低定量限在0.23~0.31μg/kg;添加不同浓度水平的胶霉毒素,平均回收率为81.8%~95.4%,变异系数≤13.2%。

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烟曲霉是侵袭性曲霉病(inva-siveaspergillosis,IA)最常见的病原菌,可产生多种免疫抑制性真菌毒素。胶霉毒素是烟曲霉产生的真菌毒素之一,是其重要的毒力因子,对人和一些哺乳动物细胞具有免疫抑制及促凋亡作用。关于胶霉毒素的毒害作用,报道主要集中在侵袭性曲霉病患者血清中[1]。周万青等[2]报道在侵袭性曲霉病动物模型和临床确诊患者血清中均可检测到胶霉毒素,预示其可作为曲霉病诊断指标。LEWIS等[3]采用LC-MS/MS方法检测了早期的侵袭性曲霉病人中的胶霉毒素的含量,推测检测胶霉毒素可作为诊断侵袭性曲霉病的一种新型方法。CERQUEIRA等[4]也采用LC-MS/MS方法检测了侵袭性曲霉病人中的胶霉毒素的含量。一些研究发现,食品和饲料中也有可能存在威胁人类和动物健康的胶霉毒素,如KOSALEC等[5]发现胶霉毒素可产生于玉米的贮存过程中,也存在于猪、牛等动物的饲料中。PENA等[6]证实胶霉毒素还存在于空气和灰尘中。所以对食品和饲料中的胶霉毒素进行残留检测很有必要。本文采用加压溶剂萃取技术(pressurized liq-uid extraction,PLE)结合全自动固相萃取技术(auto-mated solid phase extraction,ASPE)对多种食品和饲料基质进行处理,HPLC-MS/MS检测,建立了多种食品和饲料中胶霉毒素的快速检测方法。1材料与方法1.1材料和试剂胶霉毒素标准品(纯度≥97%),购自美国Sig-ma-Aldrich公司;甲醇、乙腈(色谱纯),正己烷、Na OH、HCl(分析纯),购于国药集团化学试剂有限公司;Oasis HLB柱(60 mg,3 m L),购于美国Waters公司;Mycosep 226真菌毒素净化柱(5 m L),购于奥地利Romer Labs公司;Bond Elut Mycotoxin柱(500 mg,3 m L),购于美国Varian公司。玉米、小麦、猪饲料(主要成分为玉米、大豆、鱼粉)和鸡饲料(主要成分为玉米、豆粕、麸皮)等样品购于江汉大学农贸市场,样品先粉碎,然后常温保存。猪肌肉和肝脏的样品采购于武汉家乐福超市,样品先绞碎,然后匀浆,-20℃冰箱中保存。1.2仪器与设备HPLC-MS/MS中MS/MS部分(API 4500 triple-quadrupole),美国Applied Biosystems公司;HPLC部分(LC-30AD和SIL-30AC),日本Shimadzu公司;加压溶剂萃取(PLE)设备(Dionex ASE 200),美国Sunnyvale公司;全自动固相萃取(ASPE)设备(GilsonAspec XL4),英国Anachem公司;Milli-Q超纯水系统,美国Millipore公司。1.3方法1.3.1色谱条件色谱柱:Kinetex 100 RP-18(100 mm×2.1 mm,2.6μm)(Phenomenex,USA);柱温:40℃;进样量:10μL;流动相:乙腈/0.5%乙酸水溶液(50/50,V/V),流速:0.2 m L/min;洗脱时间:5 min。1.3.2质谱条件电离方式:ESI源(+);碰撞气(CAD):6 psi;气帘气(CUR):20 psi;雾化气(GS1):60 psi;辅助气(GS2):55 psi;离子喷雾电压(IS):5 500 psi;离子源温度(TEM):550℃。胶霉毒素的母离子和子离子条件见表1。表1胶霉毒素母离子/子离子信息Table 1 Precursor/daughter ions infor

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