国产DNATyper19~(TM)试剂盒对常见生物检材的适用性研究

作者:杨乐;刘宏伟;龚政;王大伟;刘磊;齐朝阳;张建; 刊名:刑事技术 上传者:杨利平

【摘要】目的测试国产DNATyper19~(TM)试剂盒对各类常见生物检材的适用性。方法应用DNATyper19~(TM)试剂盒和IdentifilerTM Plus试剂盒对血斑、精斑、唾液斑、肌肉、软骨等各类常见生物检材DNA进行平行扩增,从分型结果一致性、图谱完整性等方面进行分析。同时,从灵敏度、对混合DNA样本的检验能力等方面对DNATyper19~(TM)试剂盒作评估。结果 620例生物检材经DNATyper19~(TM)试剂盒检验均获得完整清晰的谱带和稳定的分型结果,与IdentifilerTM Plus试剂盒在15个共有基因座上分型结果完全相同,未检见等位基因丢失现象。DNATyper19~(TM)试剂盒对0.0625ng阳性DNA样本能获得全部STR基因座分型,具有一定的微量DNA和混合DNA样本的检验能力。结论国产DNATyper19~(TM)试剂盒适用于各类常见生物检材,在日常案件检验中具有较高的应用价值。

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2.公安部物证鉴定中心,北京市现场物证检验工程技术研究中心,北京100038)公安部物证鉴定中心研发的我国第一个国产荧光STR复合扩增试剂盒DNATyper15TM试剂盒[1],经大量研究表明其完全可以替代进口试剂盒而用于实际案件检验和DNA数据库建设[2-5]。随着DNA技术的深入应用,DNATyper15TM试剂盒难以完全满足DNA检验的需求,为此,公安部物证鉴定中心新近研发了DNATyper19TM试剂盒。本研究通过对620例血斑、精斑、唾液斑、肌肉、软骨等各类常见生物检材的DNA以DNATyp-er19TM试剂盒和IdentifilerTM Plus试剂盒进行平行扩增,从分型结果一致性、图谱完整性等方面比较分析DNATyper19TM试剂盒对各类常见生物检材的检验效能。同时,从灵敏度、对混合DNA样本的检验能力等方面对该试剂盒作评估。1材料与方法1.1仪器、试剂与检材Maxwell 16提取工作站(Promega公司);9700型PCR扩增仪、3500x L型遗传分析仪(AB公司);Chelex-100(Bio-Rad公司);QIAamp DNA Investi-gator Kit、Mag Attract M48 DNA Manual Kit(Qiagen公司);DNA IQTMCasework Pro Kit(Promega公司);DNATyper19TM试剂盒(公安部物证鉴定中心);IdentifilerTM Plus试剂盒(AB公司)。620例生物检材均来自本实验室日常检案存留,其中,血斑100例、精斑100例、唾液斑类检材350例(口腔卡100例、烟蒂100例、瓶子70例、吸管50例、咬痕类检材30例)、肌肉、软骨等腐败检材70例。瓶子、吸管、咬痕类检材采用生物物证提取专用棉签(公安部物证鉴定中心)两步擦拭法提取。其余检材直接剪取。1.2方法1.2.1 DNA提取用Chelex-100法提取血斑和口腔卡DNA;用QIAamp DNA Investigator Kit提取精斑DNA;用DNAIQTMCasework Pro Kit提取烟蒂、瓶子、吸管和咬痕类检材DNA;用Mag Attract M48 DNA Manual Kit提取肌肉、软骨等腐败检材DNA。1.2.2 PCR扩增应用DNATyper19TM试剂盒和IdentifilerTM Plus试剂盒,在AB 9700型PCR扩增仪上对上述检材DNA进行PCR扩增,操作过程按照试剂盒和仪器说明书进行。DNATyper19TM试剂盒和IdentifilerTM Plus试剂盒均采用10μL扩增体系进行扩增。瓶子、吸管、咬痕类检材DNA模板量为4μL,其余检材DNA模板量为1μL。1.2.3电泳检测扩增产物经AB 3500x L型遗传分析仪进行检测,采用Gene Mapper ID-X软件进行结果分析。1.2.4灵敏度检测将来源于DNATyper19TM试剂盒的1.0 ng/μL9947A稀释,使其浓度分别为1.0、0.5、0.25、0.125、0.0625 ng/μL,采用10μL扩增体系,分别以1.0、0.5、0.25、0.125、0.0625 ng DNA模板量对DNATyp-er19TM试剂盒进行检测。1.2.5混合DNA样本检测将1.0 ng/μL的9948和9947A按19?1、18?2、16?4、14?6、12?8、10?10、8?12、6?14、4?16、2?18、1?19比例混合,采用10μL扩增体系,以1.0 ngDNA模板量对DNATyper19TM试剂盒

参考文献

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