低出生体重儿全血氨基酸水平的变化

作者:万婷;刘洪喜;杨宇奇;龙伟;江丽华;秦志强; 刊名:现代预防医学 上传者:刘赛男

【摘要】目的探讨低出生体重儿全血氨基酸水平的变化。方法在知情同意原则下,以1 394例低出生体重儿为研究对象,按是否合并早产分为两大组:单纯低体重组和低出生体重合并早产组。采用串联质谱技术非衍生化法检测新生儿足跟血11种氨基酸含量。结果 (1)与正常对照相比,单纯低体重儿5种氨基酸出现明显的异常改变,其中瓜氨酸、苯丙氨酸明显升高,甘氨酸、蛋氨酸、酪氨酸明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。当低出生体重合并早产时,大多氨基酸的差异性将加大。(2)比较不同体重的单纯低体重儿间氨基酸水平的差异显示,4种氨基酸具有差异,其中瓜氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸随着体重增加而明显降低,甘氨酸则明显升高。(3)采用双侧限值90%参考值范围建立低出生体重儿特异性氨基酸参考范围。结论低出生体重儿存在多种氨基酸水平异常,与其出生体重有很大关系,采用特异性参考区间评估其水平十分重要。串联质谱技术是适用于临床检测氨基酸水平的可靠方法。

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低出生体重儿是指出生体重小于2 500g的婴儿,其死亡率远高于体重正常的新生儿,智力发展也会受到一定的影响[1]。早产与低出生体重常合并出现,两者已成为婴儿死亡的重要原因,且出生体重越小,婴儿死亡的风险越大,严重威胁婴儿的生命健康[2-3]。串联质谱技术已成为新生儿筛查领域最重大的进展之一,可同时进行数十种水平物分析,检测出包括氨基酸、有机酸、脂肪酸氧化水平紊乱在内的多种遗传水平性疾病。研究表明,出生体重的高低严重影响着新生儿疾病筛查中全血氨基酸的水平[4],但是在以往工作中我们发现,串联质谱检测氨基酸假阳性率偏高,尤其是早产、低体重儿等人群。本文采用串联质谱技术(Tandem mass spectrometry)检测低出生体重儿全血中氨基酸水平,分析其变化特征,并建立其特异性参考范围。1资料与方法1.1研究对象2015年4月至2016年12月在常州市妇幼保健院出生的活产低出生体重儿1 394例(男716例、女678例),按是否合并早产分为两大组:单纯低体重组(孕周>37周且体重<2 500g)167例,低体重合并早产组(孕周<37周且体重<2 500g)1 227例。选择同期4 035例正常活产新生儿作为正常对照组(孕周>37周且体重>2 500g),其中男性2 088例(51.7%)、女性1 947例(48.3%),排除孕妇发生不良妊娠情况者。3组对象临床资料见表1。表1各组对象临床资料项目正常对照组单纯低体重组低体重合并早产组N 4 035 167 1 227孕周(周)39.29±1.12 37.77±0.90 33.29±2.34婴儿体重(g)3 413.39±415.25 2 225.51±192.68 1 961.36±391.13采血天数(d)3.00(3.00-4.00)5.00(4.00-7.00)9.00(6.00-13.00)男,n(%)2 088(51.8%)73(43.7%)643(52.4%)女,n(%)1947(48.2%)94(56.3%)584(47.6%)注:正态分布资料以均值±标准差表示;偏态分布以中位数(P25~P75)表示1.2仪器与试剂Waters Acquity TM TQD串联质谱仪、Waters 2777C自动进样器、Waters 1525μHPLC泵由美国Waters公司提供;采用Perkin Elmer公司的非衍生化多种氨基酸、肉碱和琥珀酰丙酮测定试剂盒(Neo Base Non-derivatized MSMS Kit,美国Perkin Elmer公司出品)进行筛查检测,该试剂盒可检测11种氨基酸:丙氨酸(ALA)、精氨酸(ARG)、瓜氨酸(CIT)、甘氨酸(GLY)、亮氨酸(LEU+ILE+PRO-OH)、蛋氨酸(MET)、鸟氨酸(ORN)、苯丙氨酸(PHE)、脯氨酸(PRO)、酪氨酸(TYR)和缬氨酸(VAL)。1.3样本采集按照“新生儿疾病筛查技术规范(2010版)”出生72小时之后、充分哺乳6次后足跟采集4个血斑(滤纸片Schleicher&Schuell 903)。低出生体重者待2 500g或出生后20天采血。血片采集后悬空平置自然干燥成深褐色,塑料袋内封口,在规定时间内送至新生儿疾病筛查中心实验室,置4℃冰箱保存备检。1.4实验操作按本实验室串联质谱新生儿疾病筛查方法进行实验。首先从滤纸片上打下3.2mm左右的血斑放入V底微孔板,每孔加入100μl内标工作液,黏贴膜封板,孵育振荡45分钟,温度45℃,转速650~750rpm,然后转移75μl至V型无包被洁净微孔板,静止2小时后上

参考文献

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