辅酶Q10对人视网膜色素上皮细胞氧化应激损伤的保护作用

作者:张丽娟;曲进锋;白玉婧;孙摇遥;于文贞;黄旅珍;黎晓新;赵明威 刊名:中华实验眼科杂志 上传者:潘如林

【摘要】背景 有多种因素参与年龄相关性黄斑变性(AMD)的发病,其中视网膜色素上皮(RPE)细胞的氧化应激损伤与AMD的发病密切相关.实验和临床研究表明,辅酶Q10是一种强抗氧化剂,探讨其对人RPE细胞的氧化应激损伤是否有保护作用对于AMD的防治有重要的临床意义. 目的 探讨辅酶Q10对体外培养的人RPE细胞氧化应激损伤的保护作用及其作用机制. 方法 体外培养人RPE细胞,分为正常对照组(单纯培养基培养)、不同浓度(0.01、1、100 μmol/L)辅酶Q10预处理组和单纯叔丁基过氧化氢(TBHP)处理组,其中各浓度辅酶Q10预处理组以辅酶Q10预处理后暴露于TBHP,光学显微镜下观察各组RPE细胞的形态;用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测各组RPE细胞活性的变化;Annexin V-FITC/PI染色后用流式细胞仪检测细胞凋亡情况;TBARS法检测细胞的脂质过氧化水平;用DCFH-DA荧光法检测细胞内活性氧簇(ROS)水平;实时定量PCR法检测RPE细胞中促凋亡基因Fas mRNA的表达;Western blot法检测细胞中Fas蛋白的表达.结果 单纯TBHP处理组RPE细胞贴壁数量较正常对照组明显减少,而0.01、1、100 μmol/L辅酶Q10预处理组贴壁细胞数较单纯TBHP处理组增加,高浓度辅酶Q10预处理组细胞形态的改善和细胞存活的数目更接近正常对照组.与单纯TBHP处理组比较,1μmol/L、100 μmol/L辅酶Q10预处理组RPE细胞吸光度(A450)值明显增高(0.52±0.10 vs.0.25 ±0.03、0.59±0.06 vs.0.25±0.03),差异均有统计学意义(P=0.041、0.002);RPE细胞的凋亡率明显下降[(72.1±6.6)%vs.(91.7±2.3)%、(69.0±4.4)% vs.(91.7±2.3)%],差异均有统计学意义(P=0.032、0.004);0.01、1、100 μmol/L辅酶Q10预处理组的细胞脂质过氧化水平依次降低,与单纯TBHP处理组比较差异均有统计学意义(P=0.047、0.030、0.015),与单纯TBHP组相比,0.01、1、100 μmol/L辅酶Q10预处理组细胞内ROS水平逐渐下降,1μmol/L、100tμmol/L辅酶Q10预处理组细胞内ROS水平明显低于单纯TBHP处理组(5.25±0.90 vs.11.39±2.30、7.91 ±0.80 vs.11.39±2.30),差异均有统计学意义(P=0.028、0.007);与单纯TBHP处理组相比,辅酶Q10预处理组细胞中Fas mRNA表达量均有不同程度的下降,1 μmol/L、100 μmol/L辅酶Q10预处理组细胞中Fas mRNA表达量的差异均有统计学意义(P=0.049、0.008);0.01、1、100μmol/L辅酶Q10预处理组细胞中Fas蛋白表达量均明显下降,差异均有统计学意义(P=0.001、0.000、0.000). 结论 辅酶Q10对体外培养的人RPE细胞具有保护作用,其作用在一定范围内呈浓度依赖性,这种保护作用可能与减少细胞的氧化应激损伤和抑制细胞凋亡有关.

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中华实验眼科杂志 2013年 11月第 31卷第 11期 Chin J Exp Ophthalmol,November 2013,Vo1.31,No.11 辅酶 Q10对人视 网膜色素上皮细胞氧化应激 损伤 的保护作用 张 丽娟 曲进锋 白 玉婧 孙 摇 遥 于 文 贞 黄 旅 珍 黎 晓新 赵 明威 · 实 验 研 究 · 【摘要】 背景 有多种因素参与年龄相关性黄斑变性(AMD)的发病 ,其中视网膜色素上皮(RPE)细胞 的氧化应激损伤与 AMD的发 病密切相关。实验和 临床研究 表 明,辅 酶 Q10是一种 强抗 氧化剂 ,探讨 其对人 RPE细胞 的氧化应激 损伤是否有保护作用对于 AMD的防治有重要的I临床意义 。 目的 探讨辅酶 Q10对体 外培养 的人 RPE细胞 氧化应激损 伤 的保 护作用及 其作用机 制。 方法 体外培 养人 RPE细胞 ,分 为正常对 照组 (单纯培养基 培养)、不 同浓 度(0.01、1、100 p~mol/L)辅酶 QlO预处 理组 和单纯 叔丁基过 氧化氢 (TBHP) 处理组 ,其 中各 浓度 辅酶 QlO预处理组 以辅酶 Q10预处理后暴露 于 TBHP,光学显微 镜下观察 各组 RPE细胞 的形 态 ;用细胞计数试剂 盒一8(CCK一8)法检测各组 RPE细胞活 性的变化 ;Annexin V—FITC/PI染色后用 流式细 胞 仪检测细胞凋亡情 况 ;TBARS法 检测 细胞 的脂 质 过氧 化水 平 ;用 DCFH—DA荧光 法检 测 细胞 内 活性 氧簇 (ROS)水 平 ;实 时定量 PCR法检测 RPE细胞 中促凋亡基 因 Fas mRNA的表达 ;Western blot法 检测细胞 中 Fas 蛋 白的表 达。 结果 单 纯 TBHP处理组 RPE细胞 贴壁数量较正常对照组明显减少 ,而 0.O1、1、100 ixmol/L辅 酶 QlO预处理组贴壁 细胞 数较 单纯 TBHP处理组 增加 ,高浓 度辅酶 Q10预处理 组细胞 形态 的改善 和细胞存 活的数 目更接近正常对照组 。与单 纯 TBHP处理组 比较 ,1 p~mol/L、100~mol/L辅 酶 QlO预处 理组 RPE细胞 吸光度 (A 。)值 明显增高 (0.52_+0.10 VS.0.25±0.03、0.59±0.06 VS.0.25 4-0.03),差 异均 有统计 学意 义 (P= 0.041、0.002);RPE细胞 的凋 亡率 明显 下 降 [(72.1±6.6)% VS.(91.7 4-2.3)%、(69.04-4.4)% VS.(91.7± 2.3)% ],差 异均有统计学意义 (P=0.032、0.004);0.01、1、100 p.mol/L辅 酶 QlO预处理组 的细胞脂质 过氧化 水平依 次降低 ,与单纯 TBHP处理组 比较差异 均有统计 学意义 (P=0.047、0.030、0.015),与单 纯 TBHP组相 比 ,0.01、1、100 p~mol/L辅酶 Q10预处理组 细胞 内 ROS水平逐 渐下降 ,I txmol/L、100~mol/L辅 酶 Q10预处理 组 细胞 内 ROS水平明显低于单 纯 TBHP处 理组 (5.254-0.90 VS.11.39±2.30、7.91 4-0.80 VS.11.394-2.30),差 异均 有统计学意义 (P=0.028、0.007);与单纯 TBHP处理组 相 比,辅酶 Q10预处 理组 细胞 中 Fas mRNA表达 量均有 不同程度 的

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