柿叶提取物对氧化应激损伤U257神经胶质细胞的保护作用

作者:陈君丽;梁健健;甄少立 刊名:今日药学 上传者:俞校辉

【摘要】目的研究中成药"柿叶提取物"对体外过氧化氢(H2O2)引起U257神经胶质细胞氧化应激损伤的保护作用及其保护机制。方法体外培养U257神经胶质细胞,建立氧化应激引起的细胞损伤模型;采用MTT比色法测定细胞的存活率;以Hoechst33258荧光染色法检测细胞凋亡;用丙二醛(MDA)及还原型谷胱甘肽(GSH)测定试剂盒作相应酶活性或产物含量分析。结果U257神经胶质细胞与300μmol/L的H2O2共孵育10h可诱导细胞凋亡。柿叶提取物(5、10、30μg/ml)3个剂量组均能降低凋亡细胞百分率,降低细胞内MDA含量,提高细胞内GSH含量,该作用呈剂量依赖性。结论柿叶提取物片对氧化应激引起的U257神经胶质细胞损伤有明显的保护作用,其保护机制与细胞内氧化还原的平衡状态改善有关。

全文阅读

“柿叶提取物”临床上用于治疗脑动脉硬化症、短暂脑缺血发作、脑血栓形成、脑血栓形成后遗症、脑栓塞等伴有或不伴有高血压、冠心病心绞痛,疗效显著,未发现明显不良反应[1,2]。现代药理研究表明,柿叶提取物能使麻醉狗冠状动脉血流量平均增加79.3%,冠状动脉阻力下降49.3%[3,4];可抑制氯化钾引起的离体家兔大动脉的收缩,抑制率为75.1%;对离体兔心和在体蛙心均有增强冠状动脉血流量的作用[3,5]。从柿叶中提取的黄酮苷,给狗静脉注射(5mg/kg),能降低血压,增加冠状动脉流量(33%36%)[4];在离体兔心标本上,也能增加冠状动脉流量[5]。此外,由柿叶中所提黄酮苷制成注射液,能使家兔耳静脉扩张,冠状动脉血流量增加30%40%[3]。另据报道,柿叶醇提取物能改善麻醉狗心脏泵功能,降低心肌耗氧量,改善全身血液循环[4];还能显著提高家兔红细胞电泳率,同时全血和血浆比黏度下降,纤维蛋白原减少,即具有一定的活血化瘀作用[6];也可增加小鼠对窒息性缺氧的耐力及对大鼠急性心肌缺血有一定的保护作用[3]。曾研究发现柿叶提取物片有抗脑缺血神经保护作用并对氧化应激引起的NG108-15神经细胞损伤有保护作用[7,8],但柿叶提取物片对脑神经胶质细胞作用的研究尚未见报道。本文研究柿叶提取物片对氧化应激引起的U257神经胶质细胞损伤的保护作用。1材料和方法1.1细胞系U257神经胶质细胞从中国科学院上海生化细胞生物学研究所细胞库购进。1.2药品与试剂RPMI1640培养基(Gibco)公司,胎牛血清(FBS,Hyclone公司)。一次性细胞培养瓶、96孔板(Corning公司)。胰蛋白酶、噻唑蓝(MTT)和Hoechst33258等(Sigma公司产品)。丙二醛(MDA)及还原型谷胱甘肽(GSH)测定试剂盒,购自南京建成生物工程研究所。柿叶浸膏(以下简称柿叶提取物,由干柿子叶加水煮2次,浓缩至11,加乙酸乙酯萃取,回收乙酸乙酯、挥干溶剂所得,得率是1kg柿叶得提取物10.3g,由广州市第一医院提供)、芦丁(中国药品生物制品检定所购进):用二甲基亚砜(DMSO)配成2550mg/ml的无菌储备液,临用时加无血清培养基稀释到所需浓度。H2O2(Sigma):用三蒸水配成100mmol/L的溶液,后用10m的滤膜过滤,48保存。其余试剂均为国产分析纯。1.3仪器TC2323型二氧化碳培养箱(美国SHELLAB公司);MPS30相差倒置荧光显微镜(德国LEICA);5415D和TGL-16H高速冷冻离心机(德国AndreasEppendorf);2K15高速冷冻离心机(美国Sigma公司);JY92-超声波细胞粉碎机(宁波新芝科器研究所);LKBMltrospec(美国Pharmacia);ELX800酶联免疫检测仪(美国BIO-RAD公司)。1.4细胞培养按文献方法[7]稍作改进。将U257神经胶质细胞接种至培养瓶中,并培养在含10%胎牛血清、100U/ml青霉素和100g/ml链霉素的RPMI1640培养基内,在37、5%CO2温箱中培养传代,采用对数生长期的细胞进行试验。1.5实验分组与药物处理1.5.1正常对照组细胞在RPMI1640培养基培养至48h,用荧光显微镜观察培养的U257神经胶质细胞凋亡并检测细胞浆内的有关生化指标。1.5.2模型对照组细胞在RPMI1640培养基中培养24h后加入H2O2至终浓度为300mol/L,温孵10h,检测培养的U257神经胶质细胞凋亡及细胞浆内的有关生化指标。1.5.3给药组柿叶提取物(5、10、30g/ml)3个剂量组;芦

参考文献

引证文献

问答

我要提问