颗粒酶M在肿瘤细胞中的表达及功能研究

作者:王慧茹;马文波;周春霞;张叔人 刊名: 上传者:余文财

【摘要】研究背景:慢周期肿瘤细胞或休眠肿瘤细胞被认为能够抵抗传统的放化疗攻击而存活下来,并在合适地环境和条件下再次分裂增殖,从而成为肿瘤复发和转移的根源。在本实验室前期的研究发现,用5-氟尿嘧啶处理后的慢周期CT26细胞具有化疗耐药以及更高的致瘤性。为了挖掘其中的机制,我们用普通CT26和慢周期CT26做表达谱芯片比较,在众多表达呈现差异的基因中发现在免疫细胞中表达的颗粒酶M在慢周期肿瘤细胞中表达,因此做了深入研究。目的:为了明确颗粒酶M在肿瘤细胞中的表达情况以及其发挥的生物学作用。方法:在基因和蛋白水平检测颗粒酶M在肿瘤中表达;在CT26细胞中构建颗粒酶M的敲降模型,CCK-8体外检测其增殖和耐药、ELISA检测分泌细胞因子、transwell检测侵袭等方面功能变化;利用小鼠皮下成瘤模型,明确其在体内发挥的作用;western blot检测颗粒酶M敲降和过表达模型中AKT、ERK、STAT3等信号通路的变化。结果:小鼠和人肿瘤细胞系中颗粒酶M表达为阳性,慢周期CT26细胞中颗粒酶M表达上调;CT26敲降颗粒酶M后对化疗药物5-氟尿嘧啶和顺铂的杀伤更敏感,侵袭能力下降,分泌IL-6和VEGF显著降低,小鼠体内成瘤下降,肿瘤生长显著减少,相比于普通CT26,敲降后STAT3磷酸化水平显著降低。结论:我们证明了小鼠和人肿瘤细胞中表达颗粒酶M,敲降后能显著降低肿瘤细胞耐和侵袭能力,抑制STAT3信号通路活化,减少IL-6和VEGF分泌,体内显著降低肿瘤生长。

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颗粒酶M在肿瘤细胞中的表达及功能研究@王慧茹$中国医学科学院,北京协和学院,肿瘤医院肿瘤研究所免疫室 @马文波$中国医学科学院,北京协和学院,肿瘤医院肿瘤研究所免疫室 @周春霞$中国医学科学院,北京协和学院,肿瘤医院肿瘤研究所免疫室 @张叔人$中国医学科学院,北京协和学院,肿瘤医院肿瘤研究所免疫室研究背景:慢周期肿瘤细胞或休眠肿瘤细胞被认为能够抵抗传统的放化疗攻击而存活下来,并在合适地环境和条件下再次分裂增殖,从而成为肿瘤复发和转移的根源。在本实验室前期的研究发现,用5-氟尿嘧啶处理后的慢周期CT26细胞具有化疗耐药以及更高的致瘤性。为了挖掘其中的机制,我们用普通CT26和慢周期CT26做表达谱芯片比较,在众多表达呈现差异的基因中发现在免疫细胞中表达的颗粒酶M在慢周期肿瘤细胞中表达,因此做了深入研究。目的:为了明确颗粒酶M在肿瘤细胞中的表达情况以及其发挥的生物学作用。方法:在基因和蛋白水平检测颗粒酶M在肿瘤中表达;在CT26细胞中构建颗粒酶M的敲降模型,CCK-8体外检测其增殖和耐药、ELISA检测分泌细胞因子、transwell检测侵袭等方面功能变化;利用小鼠皮下成瘤模型,明确其在体内发挥的作用;westernblot检测颗粒酶M敲降和过表达模型中AKT、ERK、STAT3等信号通路的变化。结果:小鼠和人肿瘤细胞系中颗粒酶M表达为阳性,慢周期CT26细胞中颗粒酶M表达上调;CT26敲降颗粒酶M后对化疗药物5-氟尿嘧啶和顺铂的杀伤更敏感,侵袭能力下降,分泌IL-6和VEGF显著降低,小鼠体内成瘤下降,肿瘤生长显著减少,相比于普通CT26,敲降后STAT3磷酸化水平显著降低。结论:我们证明了小鼠和人肿瘤细胞中表达颗粒酶M,敲降后能显著降低肿瘤细胞耐和侵袭能力,抑制STAT3信号通路活化,减少IL-6和VEGF分泌,体内显著降低肿瘤生长。颗粒酶M;;耐药;;侵袭;;STAT3

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