细菌纳米磁小体为载体的基因疫苗研究

作者:唐翌姝;王冬梅;周春霞;马文博;张玉倩;刘滨磊;张叔人 刊名: 上传者:石儒军

【摘要】目的:DNA疫苗是一种能激发抗原特异性免疫的方法。新型纳米材料细菌纳米磁小体(Bacterial Magnetic Particles,BMP)是趋磁性细菌体内合成的磁性纳米颗粒。BMP本身所特有的独特性质,使其在许多领域得到广泛的应用,但作为基因载体的研究很少。本研究应用基因疫苗p SLC-E7-Fc作为模型,优化了BMP作为载体的基因疫苗制备及其应用方法。方法:基因疫苗p SLC-E7-Fc是运用HPV-16E7作为免疫原基因,两边分别与次级淋巴组织趋化

全文阅读

目的:DNA疫苗是一种能激发抗原特异性免疫的方法。新型纳米材料细菌纳米磁小体(BacterialMagneticParticles,BMP)是趋磁性细菌体内合成的磁性纳米颗粒。BMP本身所特有的独特性质,使其在许多领域得到广泛的应用,但作为基因载体的研究很少。本研究应用基因疫苗pSLC-E7-Fc作为模型,优化了BMP作为载体的基因疫苗制备及其应用方法。方法:基因疫苗pSLC-E7-Fc是运用HPV-16E7作为免疫原基因,两边分别与次级淋巴组织趋化 因子(SLC)和IgGFc片段基因重组。应用BMP作为载体,在不同平pH的PBS缓冲液中与pSLC-E7-Fc连接形成复合疫苗(BMP-V),并优化BMP在体外和体内进行基因传递表达的条件,在小鼠模型中证明其免疫治疗效应。结果:将BMP与DNA分别在生理盐水,不同pH的PBS中连接。结果表明在pH=4~5的PBS中BMP与DNA连接效率比在生理盐水中更加有效(96%vs79.5%,P<0.05)。电子显微镜显示BMP-V的大小和形态与未连接基因的BMP相似具有均质性,直径<100nm。半定量RT-PCR和流式细胞仪测定表明,BMP-V在体外有效转染的条件是加用600-mT磁场作用10min。小动物体内成像实验显示磁场在BMP-V在体内转染过程中起着关键作用。以免疫原性较差的小鼠TC-1肿瘤为模型,BMP-V治疗小鼠皮下肿瘤时,与对照PBS组相比,5gBMP-V治疗小鼠组的肿瘤明显比对照PBS组小生存期延长15.6天(P<0.05),但与其他剂量组(40g,20g,10g)无统计学差异(P>0.05),说明BMP-V在小鼠体内治疗中能达到微克级。在BMP-V治疗小鼠肺转移模型中,磁场作用的最佳时间与体外转染条件相同,均为10min。而BMP-V免疫的最佳方式则是皮下注射+磁场作用,其肺部肿瘤结节明显减少(42.68.28387vs194.823.64849,P<0.05)。CTL活性检测与对照PBS组相比,BMP-V免疫的小鼠显示了E7特异的CTL活性,在肿瘤中有大量的肿瘤浸润性淋巴细胞。这说明BMP-V可诱导有效的抗原特异性的细胞免疫应答。用ELISA方法检测,结果表明小鼠体内不会产生抗BMP的抗体,说明BMP无明显免疫原性。病理切片结果显示,BMP-V治疗小鼠的主要脏器与正常对照组无形态差异,说明BMP在体内应用对小鼠无毒副作用。结论:BMP可以作为一种新型,简便,安全的载体系统应用到基因传递中。本研究完善和拓展BMP在基因传递方面的应用,为BMP在体内进一步应用奠定了基础。细菌纳米磁小体为载体的基因疫苗研究@唐翌姝$北京协和医学院中国医学科学院肿瘤医院&肿瘤研究所 @王冬梅$北京协和医学院中国医学科学院肿瘤医院&肿瘤研究所 @周春霞$北京协和医学院中国医学科学院肿瘤医院&肿瘤研究所 @马文博$北京协和医学院中国医学科学院肿瘤医院&肿瘤研究所 @张玉倩$北京协和医学院中国医学科学院肿瘤医院&肿瘤研究所 @刘滨磊$北京协和医学院中国医学科学院肿瘤医院&肿瘤研究所 @张叔人$北京协和医学院中国医学科学院肿瘤医院&肿瘤研究所目的:DNA疫苗是一种能激发抗原特异性免疫的方法。新型纳米材料细菌纳米磁小体(BacterialMagneticParticles,BMP)是趋磁性细菌体内合成的磁性纳米颗粒。BMP本身所特有的独特性质,使其在许多领域得到广泛的应用,但作为基因载体的研究很少。本研究应用基因疫苗pSLC-E7-Fc作为模型,优化了BMP作为载体的基因疫苗制备及其应用方法。方法:基因疫苗pSLC-E7-

参考文献

引证文献

问答

我要提问