东非黑白疣猴肺炎克雷伯氏菌的分离鉴定

作者:王艳君;冯永其;徐静; 刊名:上海畜牧兽医通讯 上传者:赵蓉

【摘要】我园新引进的东非黑白疣猴群体中突然死亡2只,从实质脏器组织(心、肝、脾、肺、肾)、胸腔积液、心血样本中均分离得到细菌,对分离到的菌株纯化后进行形态特征观察、生化试验、药敏试验以及小鼠致病性试验,并进行16SrDNA序列测定分析。结果表明该菌株为肺炎克雷伯氏菌,致病性试验显示其对小鼠具有较强致病性,死亡小鼠具有与该死亡黑白疣猴一致的肺部病理剖解症状,并从死亡小鼠体内分离到一致的菌株,表明引起此次黑白疣猴死亡的病原菌为肺炎克雷伯氏菌。

全文阅读

肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella Pneumoniae)为革兰阴性杆菌,肠杆菌科克雷伯氏菌属中最为重要的一类菌,广泛存在于自然界,是人和动物呼吸道及肠道内寄生性机会致病菌,在免疫功能低下的情况下,能致肺炎、脑膜炎及其他化脓性炎症、肝脓肿、伤口感染及全身败血症等。东非黑白疣猴为我园2017年5月26日引进的新品种,其中突然死亡的2只正处于检疫期,该群黑白疣猴属于野捕群体,胆子极小,稍有动静便立刻逃窜,这给饲养员的平时观察造成了一定的困难。2只黑白疣猴均被突然发现死于笼舍内,见口吐白沫,根据死亡的黑白疣猴发病情况、剖检变化,结合细菌的分离鉴定和动物试验,表明该2只黑白疣猴因毒力较强的肺炎克雷伯氏菌感染致严重肺炎,并引发败血症而死亡。随后,有临床症状表现的其余黑白疣猴经及时治疗后均痊愈。关于该菌对于人、畜、禽等各种动物,包括野生动物(小熊猫、大熊猫、长臂猿等)均有相关致病性报道。我园为首次从病死猴的样本中分离到该菌,为临床及时准确诊断和治疗本病提供依据。1材料与方法1.1材料1.1.1病料采集:对死亡的2只黑白疣猴第一时间进行剖解,无菌采集其心、肝、脾、肺、肾、心血及胸腔积液样本。1.1.2试剂材料:分离培养所用哥伦比亚血琼脂培养基、普通营养琼脂培养基等,购自上海科玛嘉微生物技术有限公司;微量生化鉴定管、药物敏感纸片,购自杭州滨和微生物试剂有限公司;BALB/c昆明小白鼠,购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司。1.2方法1.2.1菌株的分离培养:将无菌采集的病料样本分别无菌划线接种于哥伦比亚血琼脂培养基、普通营养琼脂培养基,置37℃恒温培养箱培养18~24h,观察菌落形态特征,革兰染色,光学显微镜下观察细菌菌体形态和染色特性。根据特性将纯培养的菌落接种于肠杆菌鉴别培养基(麦康凯、伊红美蓝、SS)中培养18~24h后观察菌落生长颜色、形态。1.2.2菌株特性鉴定:挑取分离纯化后的菌落进行生化特性鉴定,首先进行氧化酶试验,而后接种于肠杆菌科微量生化试剂盒(硫化氢、苯丙氨酸脱羧酶、靛基质、枸橼酸盐、尿素酶、葡萄糖等微量生化试管),置37℃培养箱,培养24~48h,观察和记录试验结果,并对纯化菌株进行16SrDNA扩增、测序。1.2.3菌株药敏试验:选取15种抗菌药物纸片,采用纸片扩散法,对分离纯化的该菌株进行药物敏感试验,根据抑菌圈直径的大小和各抗菌药的具体标准评定为高度敏感(S)、中度敏感(I)及耐药(R)。1.2.4小鼠致病性试验:将分离纯化的该菌株制成混悬液,进行人工感染小鼠试验。将BALB/c小鼠随机分组,每组5只,腹腔注射0.5mL/只菌液作为试验组,同时给予等剂量的无菌生理盐水作为对照组,分别观察小鼠临床症状;对死亡的小鼠进行剖解,观察各组织器官病变,并无菌采集其病料,分离细菌纯化并鉴定。2结果2.1剖检病变心耳少量出血,肺部大块严重出血,呈大理石样变,气管内充满泡沫状液体,肾脏的皮质与髓质界限模糊。2.2菌株分离培养特性及形态观察无菌采集的心、肝、脾、肺、肾、心血及胸腔积液样本经平板划线培养后均见大量的细菌生长,菌落形态相似。分离纯化后的菌株经革兰染色镜检,为革兰阴性的粗短杆菌,单个、成双或短链排列,菌体两端钝圆,有荚膜无芽孢。该分离菌对营养要求不高,普通营养琼脂即可生长;在血琼脂培养基上均生长为灰白色、湿润光亮黏稠、隆起的大菌落,不溶血,常融合在一起,接种环挑之牵拉成丝;麦康凯琼脂培养基上生长为粉红色黏性大菌落,隆起,易融合,接种环挑之也可见丝状黏连;SS琼脂培养基上生长为粉色,伊红美蓝琼脂培养基生长为紫黑色,未见金属光泽。培养基上生长形

参考文献

引证文献

问答

我要提问